江苏农业科学
江囌農業科學
강소농업과학
JIANGSU AGRICULTURAL SCIENCES
2014年
8期
48-50
,共3页
郑舒文%田有亮%白玉娥%何炎红
鄭舒文%田有亮%白玉娥%何炎紅
정서문%전유량%백옥아%하염홍
沙地云杉%叶基因组DNA%ISSR-PCR%优化
沙地雲杉%葉基因組DNA%ISSR-PCR%優化
사지운삼%협기인조DNA%ISSR-PCR%우화
以沙地云杉叶基因组DNA为材料,采用单因素试验方法对ISSR-PCR体系中的主要成分Mg2+、dNTPs、Taq DNA聚合酶、引物浓度、退火温度进行筛选,建立并优化沙地ISSR-PCR反应体系。结果表明,UBC835是最适引物,适宜退火温度为50℃。沙地云杉ISSR-PCR分析的最适反应体系(20μL PCR反应体系)为:2.0 mmol/L Mg2+、1.0 U/μL Taq DNA聚合酶、0.25 mmol/L dNTPs、0.25μmol/L引物、50 ng/μL模板DNA。 PCR扩增程序:94℃预变性4 min;94℃变性45 s,50℃退火45 s,72℃延伸2 min,40个循环;72℃延伸7 min,4℃保存。
以沙地雲杉葉基因組DNA為材料,採用單因素試驗方法對ISSR-PCR體繫中的主要成分Mg2+、dNTPs、Taq DNA聚閤酶、引物濃度、退火溫度進行篩選,建立併優化沙地ISSR-PCR反應體繫。結果錶明,UBC835是最適引物,適宜退火溫度為50℃。沙地雲杉ISSR-PCR分析的最適反應體繫(20μL PCR反應體繫)為:2.0 mmol/L Mg2+、1.0 U/μL Taq DNA聚閤酶、0.25 mmol/L dNTPs、0.25μmol/L引物、50 ng/μL模闆DNA。 PCR擴增程序:94℃預變性4 min;94℃變性45 s,50℃退火45 s,72℃延伸2 min,40箇循環;72℃延伸7 min,4℃保存。
이사지운삼협기인조DNA위재료,채용단인소시험방법대ISSR-PCR체계중적주요성분Mg2+、dNTPs、Taq DNA취합매、인물농도、퇴화온도진행사선,건립병우화사지ISSR-PCR반응체계。결과표명,UBC835시최괄인물,괄의퇴화온도위50℃。사지운삼ISSR-PCR분석적최괄반응체계(20μL PCR반응체계)위:2.0 mmol/L Mg2+、1.0 U/μL Taq DNA취합매、0.25 mmol/L dNTPs、0.25μmol/L인물、50 ng/μL모판DNA。 PCR확증정서:94℃예변성4 min;94℃변성45 s,50℃퇴화45 s,72℃연신2 min,40개순배;72℃연신7 min,4℃보존。