江苏农业科学
江囌農業科學
강소농업과학
JIANGSU AGRICULTURAL SCIENCES
2014年
8期
32-34,35
,共4页
张笛%张勇攀%钱文正%于恩琪%秦爱建%金文杰
張笛%張勇攀%錢文正%于恩琪%秦愛建%金文傑
장적%장용반%전문정%우은기%진애건%금문걸
致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌%外膜蛋白前体%克隆与表达
緻鵝卵黃性腹膜炎大腸桿菌%外膜蛋白前體%剋隆與錶達
치아란황성복막염대장간균%외막단백전체%극륭여표체
以致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌分离株G8107菌株基因组DNA为模板,用PCR法扩增ompA precursor基因, PCR产物用EcoRⅠ、XhoⅠ双酶切,酶切产物回收与相同黏性末端的表达载体 pET-32a(+)连接构建表达ompA pre-cursor的重组质粒,将此重组质粒转化入表达宿主菌BL21(DE3),抽提质粒,酶切鉴定及测序正确后诱导表达。对转化菌株以IPTG进行诱导后,裂解细菌,离心,上清进行SDS-PAGE鉴定。测序结果显示,ompA precursor基因大小为1014 bp,编码338个氨基酸残基,蛋白相对分子质量约为36。原核表达产物经 SDS -PAGE 分析表明,以28℃1.0 mmol/L 的IPTG诱导6 h,该基因表达效果最好。经Western Blot检测,表达的重组蛋白可与抗His标签蛋白单抗反应。
以緻鵝卵黃性腹膜炎大腸桿菌分離株G8107菌株基因組DNA為模闆,用PCR法擴增ompA precursor基因, PCR產物用EcoRⅠ、XhoⅠ雙酶切,酶切產物迴收與相同黏性末耑的錶達載體 pET-32a(+)連接構建錶達ompA pre-cursor的重組質粒,將此重組質粒轉化入錶達宿主菌BL21(DE3),抽提質粒,酶切鑒定及測序正確後誘導錶達。對轉化菌株以IPTG進行誘導後,裂解細菌,離心,上清進行SDS-PAGE鑒定。測序結果顯示,ompA precursor基因大小為1014 bp,編碼338箇氨基痠殘基,蛋白相對分子質量約為36。原覈錶達產物經 SDS -PAGE 分析錶明,以28℃1.0 mmol/L 的IPTG誘導6 h,該基因錶達效果最好。經Western Blot檢測,錶達的重組蛋白可與抗His標籤蛋白單抗反應。
이치아란황성복막염대장간균분리주G8107균주기인조DNA위모판,용PCR법확증ompA precursor기인, PCR산물용EcoRⅠ、XhoⅠ쌍매절,매절산물회수여상동점성말단적표체재체 pET-32a(+)련접구건표체ompA pre-cursor적중조질립,장차중조질립전화입표체숙주균BL21(DE3),추제질립,매절감정급측서정학후유도표체。대전화균주이IPTG진행유도후,렬해세균,리심,상청진행SDS-PAGE감정。측서결과현시,ompA precursor기인대소위1014 bp,편마338개안기산잔기,단백상대분자질량약위36。원핵표체산물경 SDS -PAGE 분석표명,이28℃1.0 mmol/L 적IPTG유도6 h,해기인표체효과최호。경Western Blot검측,표체적중조단백가여항His표첨단백단항반응。