CAJ | 학술논문

目的:采用原核基因工程技术构建表达梅毒螺旋体外膜脂蛋白TP17的载体,并进行酶切鉴定,为获得重组抗原TP17及其用于梅毒血清学诊断试剂的研究奠定基础.方法:将化学合成的寡核苷酸(oligo)通过PCR的方法拼接成TP17目的基因的序列,并将合成好的序列克隆入pMD18-T Simple载体.以pMD18-T Simple-TP17为模板,PCR扩增TP17基因片段.PCR产物通过1.5％琼脂糖凝胶电泳回收TP17条带,随后用EcoRⅠ和Xho Ⅰ对TP17回收所得片段及目的载体pET 22b进行双酶切并连接.连接产物电转化至感受态细胞DH10B中后,挑取克隆,提取质粒并鉴定.最后将质粒转化至BL21菌株中.挑取克隆,提质粒,进行鉴定.结果:PCR扩增片段、双酶切均出现445 bp大小的目的基因条带,与预期结果相符.结论:本研究成功构建了重组质粒pET 22b-TP17,为下一步用IPTG诱导BL21菌株表达重组目的蛋白的研究奠定了基础.
목적:채용원핵기인공정기술구건표체매독라선체외막지단백TP17적재체,병진행매절감정,위획득중조항원TP17급기용우매독혈청학진단시제적연구전정기출.방법:장화학합성적과핵감산(oligo)통과PCR적방법병접성TP17목적기인적서렬,병장합성호적서렬극륭입pMD18-T Simple재체.이pMD18-T Simple-TP17위모판,PCR확증TP17기인편단.PCR산물통과1.5％경지당응효전영회수TP17조대,수후용EcoRⅠ화Xho Ⅰ대TP17회수소득편단급목적재체pET 22b진행쌍매절병련접.련접산물전전화지감수태세포DH10B중후,도취극륭,제취질립병감정.최후장질립전화지BL21균주중.도취극륭,제질립,진행감정.결과:PCR확증편단、쌍매절균출현445 bp대소적목적기인조대,여예기결과상부.결론:본연구성공구건료중조질립pET 22b-TP17,위하일보용IPTG유도BL21균주표체중조목적단백적연구전정료기출.