渔业科学进展
漁業科學進展
어업과학진전
MARINE FISHERIES RESEARCH
2014年
3期
126-133
,共8页
姜娓娓%李秋芬%刘淮德%李晓龙
薑娓娓%李鞦芬%劉淮德%李曉龍
강미미%리추분%류회덕%리효룡
GyrB基因%沉积环境%气单胞菌属%实时荧光定量PCR
GyrB基因%沉積環境%氣單胞菌屬%實時熒光定量PCR
GyrB기인%침적배경%기단포균속%실시형광정량PCR
GyrB gene%Sediment environment of aquaculture%Aeromonas%Real-time fluorescent quantitative PCR
利用GyrB基因的特异性引物建立沉积环境中气单胞菌属细菌的实时荧光定量PCR检测方法.将已知浓度的气单胞菌菌液加入灭菌的沉积物样品中,作为模拟沉积物样品.通过选择和优化沉积物DNA提取方法、特异性引物、标准曲线模板,建立沉积环境中气单胞菌属细菌准确检验的实时荧光定量PCR方法,同时验证该方法的特异性、灵敏性、重复性.结果表明,采用改进的溶菌酶-SDS温和裂解法提取沉积物DNA,以扩增GyrB基因片段的IAF和IAR为特异性引物,并直接以模拟沉积物样品DNA为标准品构建标准曲线,可以建立适用于定量检测沉积环境中气单胞菌属细菌的实时荧光定量PCR方法.该方法可灵敏、特异、准确地定量检测刺参养殖池塘底泥中气单胞菌属中不同种的细菌,检出效率可达103 CFU/g.统计分析显示,变异系数为0.21％-0.80％,均小于5％,表明重复性良好.
利用GyrB基因的特異性引物建立沉積環境中氣單胞菌屬細菌的實時熒光定量PCR檢測方法.將已知濃度的氣單胞菌菌液加入滅菌的沉積物樣品中,作為模擬沉積物樣品.通過選擇和優化沉積物DNA提取方法、特異性引物、標準麯線模闆,建立沉積環境中氣單胞菌屬細菌準確檢驗的實時熒光定量PCR方法,同時驗證該方法的特異性、靈敏性、重複性.結果錶明,採用改進的溶菌酶-SDS溫和裂解法提取沉積物DNA,以擴增GyrB基因片段的IAF和IAR為特異性引物,併直接以模擬沉積物樣品DNA為標準品構建標準麯線,可以建立適用于定量檢測沉積環境中氣單胞菌屬細菌的實時熒光定量PCR方法.該方法可靈敏、特異、準確地定量檢測刺參養殖池塘底泥中氣單胞菌屬中不同種的細菌,檢齣效率可達103 CFU/g.統計分析顯示,變異繫數為0.21％-0.80％,均小于5％,錶明重複性良好.
이용GyrB기인적특이성인물건립침적배경중기단포균속세균적실시형광정량PCR검측방법.장이지농도적기단포균균액가입멸균적침적물양품중,작위모의침적물양품.통과선택화우화침적물DNA제취방법、특이성인물、표준곡선모판,건립침적배경중기단포균속세균준학검험적실시형광정량PCR방법,동시험증해방법적특이성、령민성、중복성.결과표명,채용개진적용균매-SDS온화렬해법제취침적물DNA,이확증GyrB기인편단적IAF화IAR위특이성인물,병직접이모의침적물양품DNA위표준품구건표준곡선,가이건립괄용우정량검측침적배경중기단포균속세균적실시형광정량PCR방법.해방법가령민、특이、준학지정량검측자삼양식지당저니중기단포균속중불동충적세균,검출효솔가체103 CFU/g.통계분석현시,변이계수위0.21％-0.80％,균소우5％,표명중복성량호.
