食品科学
食品科學
식품과학
FOOD SCIENCE
2014年
11期
155-159
,共5页
凡宁%张洪斌%凌凯%凌国庆%胡雪芹
凡寧%張洪斌%凌凱%凌國慶%鬍雪芹
범저%장홍빈%릉개%릉국경%호설근
蜡状芽孢杆菌%β-环糊精葡萄糖基转移酶%工程菌%表达%培养条件
蠟狀芽孢桿菌%β-環糊精葡萄糖基轉移酶%工程菌%錶達%培養條件
사상아포간균%β-배호정포도당기전이매%공정균%표체%배양조건
Bacillus cereus%β-cyclodextrin glucanotransferase%engineered bacteria%expression%culture conditions
采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)法从蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)中扩增了β-环糊精葡萄糖基转移酶(β-cyclodextrin glucanotransferase,β-CGTase)基因,将该基因克隆到pBV220质粒中,转化E.coli DH5α,经氨苄青霉素抗性筛选和酶切验证后,得到能表达β-CGTase的重组大肠杆菌E.coliDH5α/pBVcgt.通过对工程菌产酶条件的优化,得到最佳产酶条件为:OD600nm值达到1.0、初始培养温度30℃、发酵培养基初始pH 8.0、温度梯度诱导39℃培养0.5h,40℃培养0.5h,41℃培养1h,42℃培养2h.酶活力由优化前的445 U/mL提高到956 U/mL,酶活力提高了1.15倍.温度梯度诱导比直接诱导酶活力提高20％.该酶的克隆表达以及发酵条件的研究表明,该酶能在大肠杆菌原核表达体系中高效表达.
採用聚閤酶鏈式反應(polymerase chain reaction,PCR)法從蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)中擴增瞭β-環糊精葡萄糖基轉移酶(β-cyclodextrin glucanotransferase,β-CGTase)基因,將該基因剋隆到pBV220質粒中,轉化E.coli DH5α,經氨芐青黴素抗性篩選和酶切驗證後,得到能錶達β-CGTase的重組大腸桿菌E.coliDH5α/pBVcgt.通過對工程菌產酶條件的優化,得到最佳產酶條件為:OD600nm值達到1.0、初始培養溫度30℃、髮酵培養基初始pH 8.0、溫度梯度誘導39℃培養0.5h,40℃培養0.5h,41℃培養1h,42℃培養2h.酶活力由優化前的445 U/mL提高到956 U/mL,酶活力提高瞭1.15倍.溫度梯度誘導比直接誘導酶活力提高20％.該酶的剋隆錶達以及髮酵條件的研究錶明,該酶能在大腸桿菌原覈錶達體繫中高效錶達.
채용취합매련식반응(polymerase chain reaction,PCR)법종사상아포간균(Bacillus cereus)중확증료β-배호정포도당기전이매(β-cyclodextrin glucanotransferase,β-CGTase)기인,장해기인극륭도pBV220질립중,전화E.coli DH5α,경안변청매소항성사선화매절험증후,득도능표체β-CGTase적중조대장간균E.coliDH5α/pBVcgt.통과대공정균산매조건적우화,득도최가산매조건위:OD600nm치체도1.0、초시배양온도30℃、발효배양기초시pH 8.0、온도제도유도39℃배양0.5h,40℃배양0.5h,41℃배양1h,42℃배양2h.매활력유우화전적445 U/mL제고도956 U/mL,매활력제고료1.15배.온도제도유도비직접유도매활력제고20％.해매적극륭표체이급발효조건적연구표명,해매능재대장간균원핵표체체계중고효표체.
