食品科学
食品科學
식품과학
FOOD SCIENCE
2014年
11期
149-154
,共6页
任军%闵伟红%詹冬玲%方丽%李慧颖%朱运明
任軍%閔偉紅%詹鼕玲%方麗%李慧穎%硃運明
임군%민위홍%첨동령%방려%리혜영%주운명
天冬氨酸激酶%克隆表达%定点突变%酶学性质
天鼕氨痠激酶%剋隆錶達%定點突變%酶學性質
천동안산격매%극륭표체%정점돌변%매학성질
aspartokinase (AK)%cloning and expression%site-directed mutation%enzymatic properties
通过序列比对和晶体结构分析发现,天冬氨酸激酶(aspartokinase,AK)的G277位点高度保守,并与抑制剂Thr通过氢键相连,对其进行定点突变和酶学性质表征.结果表明:突变体G277K的AK最适反应条件是30℃、pH 8.5;动力学实验结果显示突变体AK的正协同效应降低,趋向于米氏酶,参数S0.5、nH、酶比活力、Vmax分别是7.05 mmol/L,1.24、964.3 U/mg、32.143U/(mg·min);热稳定性实验显示,其30℃半衰期为2.3h,3h后酶活力丧失80％左右;Ni2+在低浓度时表现出显著的激活效应;有机溶剂丙三醇、异丙醇和二甲基亚砜的体积分数为1％时,对AK的酶活力有很好的激活作用,表明突变体AK对一些有机溶剂有一定的抗性;低浓度的赖氨酸和蛋氨酸对AK有激活作用.
通過序列比對和晶體結構分析髮現,天鼕氨痠激酶(aspartokinase,AK)的G277位點高度保守,併與抑製劑Thr通過氫鍵相連,對其進行定點突變和酶學性質錶徵.結果錶明:突變體G277K的AK最適反應條件是30℃、pH 8.5;動力學實驗結果顯示突變體AK的正協同效應降低,趨嚮于米氏酶,參數S0.5、nH、酶比活力、Vmax分彆是7.05 mmol/L,1.24、964.3 U/mg、32.143U/(mg·min);熱穩定性實驗顯示,其30℃半衰期為2.3h,3h後酶活力喪失80％左右;Ni2+在低濃度時錶現齣顯著的激活效應;有機溶劑丙三醇、異丙醇和二甲基亞砜的體積分數為1％時,對AK的酶活力有很好的激活作用,錶明突變體AK對一些有機溶劑有一定的抗性;低濃度的賴氨痠和蛋氨痠對AK有激活作用.
통과서렬비대화정체결구분석발현,천동안산격매(aspartokinase,AK)적G277위점고도보수,병여억제제Thr통과경건상련,대기진행정점돌변화매학성질표정.결과표명:돌변체G277K적AK최괄반응조건시30℃、pH 8.5;동역학실험결과현시돌변체AK적정협동효응강저,추향우미씨매,삼수S0.5、nH、매비활력、Vmax분별시7.05 mmol/L,1.24、964.3 U/mg、32.143U/(mg·min);열은정성실험현시,기30℃반쇠기위2.3h,3h후매활력상실80％좌우;Ni2+재저농도시표현출현저적격활효응;유궤용제병삼순、이병순화이갑기아풍적체적분수위1％시,대AK적매활력유흔호적격활작용,표명돌변체AK대일사유궤용제유일정적항성;저농도적뢰안산화단안산대AK유격활작용.
