江苏预防医学
江囌預防醫學
강소예방의학
JIANGSU JOURNAL OF PREVENTIVE MEDICINE
2014年
5期
6-9
,共4页
彭海燕%迟莹%李燕%卞倩
彭海燕%遲瑩%李燕%卞倩
팽해연%지형%리연%변천
高致病性禽流感H5N1亚型%核蛋白%克隆%真核表达
高緻病性禽流感H5N1亞型%覈蛋白%剋隆%真覈錶達
고치병성금류감H5N1아형%핵단백%극륭%진핵표체
目的 构建高致病性禽流感病毒H5N1亚型核蛋白(NP)的真核表达载体,并在哺乳动物细胞中表达、鉴定其编码重组蛋白NP.方法 采用RT-PCR法扩增NP基因,T-A克隆到pMD18-T载体中构建pMD18-T-NP质粒.经PCR、双酶切鉴定后,双酶切阳性质粒与pXJ40-HA载体,电泳后胶回收,连接目的片段,构建pXJ40-HA-NP质粒,经PCR、双酶切、测序分析鉴定为阳性的质粒即为NP蛋白的真核表达载体.转染293T细胞后,采用免疫印迹法(Western blot)鉴定重组NP蛋白的表达.结果 成功构建了高致病性禽流感病毒H5N1亚型NP基因的真核表达载体,并在293T细胞中成功表达出分子量为56kD的重组蛋白.结论 成功构建的NP蛋白真核表达载体为进一步研究其功能,研发商致病性禽流感病毒H5N1亚型的诊断、治疗方法和疫苗奠定了基础.
目的 構建高緻病性禽流感病毒H5N1亞型覈蛋白(NP)的真覈錶達載體,併在哺乳動物細胞中錶達、鑒定其編碼重組蛋白NP.方法 採用RT-PCR法擴增NP基因,T-A剋隆到pMD18-T載體中構建pMD18-T-NP質粒.經PCR、雙酶切鑒定後,雙酶切暘性質粒與pXJ40-HA載體,電泳後膠迴收,連接目的片段,構建pXJ40-HA-NP質粒,經PCR、雙酶切、測序分析鑒定為暘性的質粒即為NP蛋白的真覈錶達載體.轉染293T細胞後,採用免疫印跡法(Western blot)鑒定重組NP蛋白的錶達.結果 成功構建瞭高緻病性禽流感病毒H5N1亞型NP基因的真覈錶達載體,併在293T細胞中成功錶達齣分子量為56kD的重組蛋白.結論 成功構建的NP蛋白真覈錶達載體為進一步研究其功能,研髮商緻病性禽流感病毒H5N1亞型的診斷、治療方法和疫苗奠定瞭基礎.
목적 구건고치병성금류감병독H5N1아형핵단백(NP)적진핵표체재체,병재포유동물세포중표체、감정기편마중조단백NP.방법 채용RT-PCR법확증NP기인,T-A극륭도pMD18-T재체중구건pMD18-T-NP질립.경PCR、쌍매절감정후,쌍매절양성질립여pXJ40-HA재체,전영후효회수,련접목적편단,구건pXJ40-HA-NP질립,경PCR、쌍매절、측서분석감정위양성적질립즉위NP단백적진핵표체재체.전염293T세포후,채용면역인적법(Western blot)감정중조NP단백적표체.결과 성공구건료고치병성금류감병독H5N1아형NP기인적진핵표체재체,병재293T세포중성공표체출분자량위56kD적중조단백.결론 성공구건적NP단백진핵표체재체위진일보연구기공능,연발상치병성금류감병독H5N1아형적진단、치료방법화역묘전정료기출.
