动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
2014年
7期
47-51
,共5页
孙亭亭%马志亮%冀斌%胡文丽%陈培富
孫亭亭%馬誌亮%冀斌%鬍文麗%陳培富
손정정%마지량%기빈%호문려%진배부
红色原鸡%IFN-γ%不对称PCR%原核表达
紅色原鷄%IFN-γ%不對稱PCR%原覈錶達
홍색원계%IFN-γ%불대칭PCR%원핵표체
应用能够选择性克隆同源双链DNA的方法(PCR+1)从刀豆蛋白A诱导的红色原鸡外周血淋巴细胞中扩增γ干扰素(IFN-γ)编码区基因,双酶切后连接至克隆载体pUC18.以阳性质粒为模板扩增IFN-γ成熟肽基因,连接至原核表达载体pProEXTM HTb,筛选出阳性重组质粒HTb-IFN-γ;重组质粒在大肠埃希菌BL21 (DE3)中经IPTG诱导表达,表达产物通过SDS-PAGE和Western blot进行分析.结果表明,采用PCR+1方法扩增得到560 bp IFN-γ编码区基因,成功连接至克隆载体并以此为模板扩增出473bp成熟肽基因,构建的重组表达质粒HTb-IFN-γ在BL21 (DE3)中经IPTG诱导表达出分子质量约为21ku的IFN-γ.Western blot分析显示,表达的IFN-γ能够与抗IFN-γ多克隆抗体特异性反应,具有良好的免疫活性.
應用能夠選擇性剋隆同源雙鏈DNA的方法(PCR+1)從刀豆蛋白A誘導的紅色原鷄外週血淋巴細胞中擴增γ榦擾素(IFN-γ)編碼區基因,雙酶切後連接至剋隆載體pUC18.以暘性質粒為模闆擴增IFN-γ成熟肽基因,連接至原覈錶達載體pProEXTM HTb,篩選齣暘性重組質粒HTb-IFN-γ;重組質粒在大腸埃希菌BL21 (DE3)中經IPTG誘導錶達,錶達產物通過SDS-PAGE和Western blot進行分析.結果錶明,採用PCR+1方法擴增得到560 bp IFN-γ編碼區基因,成功連接至剋隆載體併以此為模闆擴增齣473bp成熟肽基因,構建的重組錶達質粒HTb-IFN-γ在BL21 (DE3)中經IPTG誘導錶達齣分子質量約為21ku的IFN-γ.Western blot分析顯示,錶達的IFN-γ能夠與抗IFN-γ多剋隆抗體特異性反應,具有良好的免疫活性.
응용능구선택성극륭동원쌍련DNA적방법(PCR+1)종도두단백A유도적홍색원계외주혈림파세포중확증γ간우소(IFN-γ)편마구기인,쌍매절후련접지극륭재체pUC18.이양성질립위모판확증IFN-γ성숙태기인,련접지원핵표체재체pProEXTM HTb,사선출양성중조질립HTb-IFN-γ;중조질립재대장애희균BL21 (DE3)중경IPTG유도표체,표체산물통과SDS-PAGE화Western blot진행분석.결과표명,채용PCR+1방법확증득도560 bp IFN-γ편마구기인,성공련접지극륭재체병이차위모판확증출473bp성숙태기인,구건적중조표체질립HTb-IFN-γ재BL21 (DE3)중경IPTG유도표체출분자질량약위21ku적IFN-γ.Western blot분석현시,표체적IFN-γ능구여항IFN-γ다극륭항체특이성반응,구유량호적면역활성.
