新疆农业科学
新疆農業科學
신강농업과학
XINJIANG AGRICULTURAL SCIENCES
2014年
5期
792-800
,共9页
谭兰%李榕%袁哈利%贺怡%梁卓%谢全亮%李鸿彬
譚蘭%李榕%袁哈利%賀怡%樑卓%謝全亮%李鴻彬
담란%리용%원합리%하이%량탁%사전량%리홍빈
棉花%GhPLDα基因%表达
棉花%GhPLDα基因%錶達
면화%GhPLDα기인%표체
Gossypium hirsutum%GhPLDα gene%expression
[目的]棉花磷脂酶D(GhPLDα)基因的克隆、序列功能结构域分析及表达.[方法]以陆地棉胚珠和纤维为材料提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增得到PLDα基因的cDNA片段,将其构建到原核表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)并进行体外诱导表达,通过SDS-PAGE检测目的蛋白的表达,利用分光光度法检测酶活性,采取RT-PCR方法检测基因表达.[结果]从发育的棉花胚珠和纤维混合材料中克隆得到的磷脂酶基因的开放读码框为2 421 bp,编码包含807个氨基酸的蛋白质,分子量约为88 kDa.通过同源序列比对和功能结构域分析,GhPLDα具有典型的磷脂酶D家族(HKD)结构域,同时还存在蛋白激酶C结构域2(C2结构域).构建了pET28a-GhPLDα原核表达载体;获得分子量约为88 kDa左右的重组蛋白GhPLDα.半定量RT-PCR结果表明GhPLDα基因可能参与棉花胚珠与纤维发育过程.[结论]GhPLDα基因的克隆、序列分析和表达为进一步研究棉花GhPLDα基因在胚珠和纤维发育中过程的功能奠定了基础.
[目的]棉花燐脂酶D(GhPLDα)基因的剋隆、序列功能結構域分析及錶達.[方法]以陸地棉胚珠和纖維為材料提取總RNA,利用RT-PCR技術擴增得到PLDα基因的cDNA片段,將其構建到原覈錶達載體pET-28a中,轉化大腸桿菌BL21(DE3)併進行體外誘導錶達,通過SDS-PAGE檢測目的蛋白的錶達,利用分光光度法檢測酶活性,採取RT-PCR方法檢測基因錶達.[結果]從髮育的棉花胚珠和纖維混閤材料中剋隆得到的燐脂酶基因的開放讀碼框為2 421 bp,編碼包含807箇氨基痠的蛋白質,分子量約為88 kDa.通過同源序列比對和功能結構域分析,GhPLDα具有典型的燐脂酶D傢族(HKD)結構域,同時還存在蛋白激酶C結構域2(C2結構域).構建瞭pET28a-GhPLDα原覈錶達載體;穫得分子量約為88 kDa左右的重組蛋白GhPLDα.半定量RT-PCR結果錶明GhPLDα基因可能參與棉花胚珠與纖維髮育過程.[結論]GhPLDα基因的剋隆、序列分析和錶達為進一步研究棉花GhPLDα基因在胚珠和纖維髮育中過程的功能奠定瞭基礎.
[목적]면화린지매D(GhPLDα)기인적극륭、서렬공능결구역분석급표체.[방법]이륙지면배주화섬유위재료제취총RNA,이용RT-PCR기술확증득도PLDα기인적cDNA편단,장기구건도원핵표체재체pET-28a중,전화대장간균BL21(DE3)병진행체외유도표체,통과SDS-PAGE검측목적단백적표체,이용분광광도법검측매활성,채취RT-PCR방법검측기인표체.[결과]종발육적면화배주화섬유혼합재료중극륭득도적린지매기인적개방독마광위2 421 bp,편마포함807개안기산적단백질,분자량약위88 kDa.통과동원서렬비대화공능결구역분석,GhPLDα구유전형적린지매D가족(HKD)결구역,동시환존재단백격매C결구역2(C2결구역).구건료pET28a-GhPLDα원핵표체재체;획득분자량약위88 kDa좌우적중조단백GhPLDα.반정량RT-PCR결과표명GhPLDα기인가능삼여면화배주여섬유발육과정.[결론]GhPLDα기인적극륭、서렬분석화표체위진일보연구면화GhPLDα기인재배주화섬유발육중과정적공능전정료기출.
