军事医学
軍事醫學
군사의학
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2014年
6期
466-470
,共5页
曹叶%马胜利%何湘%钟辉%魏从文
曹葉%馬勝利%何湘%鐘輝%魏從文
조협%마성리%하상%종휘%위종문
耶尔森菌,鼠疫%YopJ%克隆%突变体%真核表达%荧光素酶报告基因
耶爾森菌,鼠疫%YopJ%剋隆%突變體%真覈錶達%熒光素酶報告基因
야이삼균,서역%YopJ%극륭%돌변체%진핵표체%형광소매보고기인
Yersinia pestis%YopJ%cloning%mutant%eukaryotic expression%luciferase report assay
目的 构建和表达鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis)效应蛋白YopJ C172A、F177L、K206E突变真核表达载体,并检测其在RIG Ⅰ样受体(RLR)信号通路中的生物活性.方法 通过PCR和测序检测pCMV-Myc-YopJ的准确性,将重组PCR技术获得的3种突变体的突变片段定向克隆到pCMV-Myc载体中,在HEK293细胞中瞬时表达,并利用荧光素酶报告基因技术检测YopJ及其3种突变体对环二鸟苷酸(c-di-GMP)激活干扰素-β(IFN-β)转录活性的影响.结果 成功构建3种突变的真核表达质粒,在c-di-GMP刺激情况下,YopJ F177L、YopJ K206E与YopJ相比,对IFN-β转录活性的抑制作用没有显著差异,而YopJ C172A与YopJ有极显著差异,对IFN-β的抑制作用明显降低.结论 YopJ 172位是其抑制RLR信号通路的酶活性位点,与文献报道一致,而177位或206位则没有这种作用,这为进一步探究YopJ参与Y.pestis致病性的作用靶点和机制打下了良好基础.
目的 構建和錶達鼠疫耶爾森菌(Yersinia pestis)效應蛋白YopJ C172A、F177L、K206E突變真覈錶達載體,併檢測其在RIG Ⅰ樣受體(RLR)信號通路中的生物活性.方法 通過PCR和測序檢測pCMV-Myc-YopJ的準確性,將重組PCR技術穫得的3種突變體的突變片段定嚮剋隆到pCMV-Myc載體中,在HEK293細胞中瞬時錶達,併利用熒光素酶報告基因技術檢測YopJ及其3種突變體對環二鳥苷痠(c-di-GMP)激活榦擾素-β(IFN-β)轉錄活性的影響.結果 成功構建3種突變的真覈錶達質粒,在c-di-GMP刺激情況下,YopJ F177L、YopJ K206E與YopJ相比,對IFN-β轉錄活性的抑製作用沒有顯著差異,而YopJ C172A與YopJ有極顯著差異,對IFN-β的抑製作用明顯降低.結論 YopJ 172位是其抑製RLR信號通路的酶活性位點,與文獻報道一緻,而177位或206位則沒有這種作用,這為進一步探究YopJ參與Y.pestis緻病性的作用靶點和機製打下瞭良好基礎.
목적 구건화표체서역야이삼균(Yersinia pestis)효응단백YopJ C172A、F177L、K206E돌변진핵표체재체,병검측기재RIG Ⅰ양수체(RLR)신호통로중적생물활성.방법 통과PCR화측서검측pCMV-Myc-YopJ적준학성,장중조PCR기술획득적3충돌변체적돌변편단정향극륭도pCMV-Myc재체중,재HEK293세포중순시표체,병이용형광소매보고기인기술검측YopJ급기3충돌변체대배이조감산(c-di-GMP)격활간우소-β(IFN-β)전록활성적영향.결과 성공구건3충돌변적진핵표체질립,재c-di-GMP자격정황하,YopJ F177L、YopJ K206E여YopJ상비,대IFN-β전록활성적억제작용몰유현저차이,이YopJ C172A여YopJ유겁현저차이,대IFN-β적억제작용명현강저.결론 YopJ 172위시기억제RLR신호통로적매활성위점,여문헌보도일치,이177위혹206위칙몰유저충작용,저위진일보탐구YopJ삼여Y.pestis치병성적작용파점화궤제타하료량호기출.
