作物学报
作物學報
작물학보
ACTA AGRONOMICA SINICA
2014年
7期
1190-1196
,共7页
王云鹏%马景勇%马瑞%马建%刘文国
王雲鵬%馬景勇%馬瑞%馬建%劉文國
왕운붕%마경용%마서%마건%류문국
宏基因组%水稻%农杆菌%遗传转化
宏基因組%水稻%農桿菌%遺傳轉化
굉기인조%수도%농간균%유전전화
Metagenomics%Rice%Agrobacterium tumefaciens%Genetic transformation
EPSPS (5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶,EC 2.5.1.19)是植物芳香族氨基酸和植物次生代谢产物生物合成中莽草酸途径的关键酶;同时也是广谱性除草剂草甘膦的作用目标.本实验通过对草甘膦污染土壤宏基因组文库的建立及筛选,成功克隆了一个新的草甘膦抗性的EPSPS基因(命名为soilEPSPS).序列分析表明,soilEPSPS基因全长1404 bp,其编码的467个氨基酸中未涉及已公布专利中保护的氨基酸序列.原核功能验证表明,该基因对草甘膦的耐受能力优于EPSPS CP4基因.将该基因与水稻Rubisco SSU引导肽相融合构建由actin启动子驱动的植物表达载体,用农杆菌介导法实现了水稻的遗传转化.抗性再生植株的PCR和Southern杂交结果表明所获得的26株再生植株均为转基因阳性植株,其中共有3个单拷贝转化事件.草甘膦抗性鉴定证明纯合体T2代植株能够耐受高达500 mmol L-1的草甘膦.本研究为转基因抗除草剂水稻新品种的培育奠定了基础.
EPSPS (5-烯醇丙酮莽草痠-3-燐痠閤酶,EC 2.5.1.19)是植物芳香族氨基痠和植物次生代謝產物生物閤成中莽草痠途徑的關鍵酶;同時也是廣譜性除草劑草甘膦的作用目標.本實驗通過對草甘膦汙染土壤宏基因組文庫的建立及篩選,成功剋隆瞭一箇新的草甘膦抗性的EPSPS基因(命名為soilEPSPS).序列分析錶明,soilEPSPS基因全長1404 bp,其編碼的467箇氨基痠中未涉及已公佈專利中保護的氨基痠序列.原覈功能驗證錶明,該基因對草甘膦的耐受能力優于EPSPS CP4基因.將該基因與水稻Rubisco SSU引導肽相融閤構建由actin啟動子驅動的植物錶達載體,用農桿菌介導法實現瞭水稻的遺傳轉化.抗性再生植株的PCR和Southern雜交結果錶明所穫得的26株再生植株均為轉基因暘性植株,其中共有3箇單拷貝轉化事件.草甘膦抗性鑒定證明純閤體T2代植株能夠耐受高達500 mmol L-1的草甘膦.本研究為轉基因抗除草劑水稻新品種的培育奠定瞭基礎.
EPSPS (5-희순병동망초산-3-린산합매,EC 2.5.1.19)시식물방향족안기산화식물차생대사산물생물합성중망초산도경적관건매;동시야시엄보성제초제초감련적작용목표.본실험통과대초감련오염토양굉기인조문고적건립급사선,성공극륭료일개신적초감련항성적EPSPS기인(명명위soilEPSPS).서렬분석표명,soilEPSPS기인전장1404 bp,기편마적467개안기산중미섭급이공포전리중보호적안기산서렬.원핵공능험증표명,해기인대초감련적내수능력우우EPSPS CP4기인.장해기인여수도Rubisco SSU인도태상융합구건유actin계동자구동적식물표체재체,용농간균개도법실현료수도적유전전화.항성재생식주적PCR화Southern잡교결과표명소획득적26주재생식주균위전기인양성식주,기중공유3개단고패전화사건.초감련항성감정증명순합체T2대식주능구내수고체500 mmol L-1적초감련.본연구위전기인항제초제수도신품충적배육전정료기출.
