CAJ | 학술논문

目的：构建靶向钙网织蛋白（ CRT）基因的短发夹RNA（ shRNA）表达质粒并鉴定。方法设计并合成4对针对CRT基因的shRNA链，退火形成双链，与酶切的质粒pGPU6/GFP连接，构建4个重质粒，转化DH5а菌株，提取质粒，进行酶切鉴定和测序分析。脂质体法转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞，通过荧光倒置显微镜判定转染效率，并通过Western印迹法检测细胞中CRT基因及蛋白的表达水平。结果经酶切鉴定筛出的重组质粒测序结果与目的序列相同，重组质粒pGPU6/GFP/Neo-CRT构建成功；转染 MDA-MB-231细胞后，CRT基因在 mRNA及蛋白水平的表达均降低，其中pGPU6/GFP/CRT1的抑制效果最好。结论成功构建了靶向CRT基因的shRNA表达质粒，并筛选出1种对CRT基因有显著抑制作用的shRNA。
목적：구건파향개망직단백（ CRT）기인적단발협RNA（ shRNA）표체질립병감정。방법설계병합성4대침대CRT기인적shRNA련，퇴화형성쌍련，여매절적질립pGPU6/GFP련접，구건4개중질립，전화DH5а균주，제취질립，진행매절감정화측서분석。지질체법전염인유선암MDA-MB-231세포，통과형광도치현미경판정전염효솔，병통과Western인적법검측세포중CRT기인급단백적표체수평。결과경매절감정사출적중조질립측서결과여목적서렬상동，중조질립pGPU6/GFP/Neo-CRT구건성공；전염 MDA-MB-231세포후，CRT기인재 mRNA급단백수평적표체균강저，기중pGPU6/GFP/CRT1적억제효과최호。결론성공구건료파향CRT기인적shRNA표체질립，병사선출1충대CRT기인유현저억제작용적shRNA。