野生动物学报
野生動物學報
야생동물학보
Chinese Journal of Wildlife
2014年
3期
257-261
,共5页
张晓明%陈武%徐春忠%彭仕明%胡俊
張曉明%陳武%徐春忠%彭仕明%鬍俊
장효명%진무%서춘충%팽사명%호준
虎源猫传染性鼻气管炎病毒%PCR%原核表达%间接ELISA
虎源貓傳染性鼻氣管炎病毒%PCR%原覈錶達%間接ELISA
호원묘전염성비기관염병독%PCR%원핵표체%간접ELISA
为研究虎源猫传染性鼻气管炎的快速诊断试剂盒和基因亚单位疫苗,根据Genbank公布的猫传染性鼻气管炎病毒的核酸序列,设计了关于虎源猫传染性鼻气管炎病毒gD蛋白基因的引物并利用PCR扩增出gD序列,成功插入到pMD18-T Simple载体中,筛选获得重组质粒,命名为pmd-gD.将其利用HindⅢ和Xho Ⅰ酶切后,产物克隆入原核表达载体pet-32a(+)中,获得重组质粒,命名pet-gD.用IPTG进行诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE和Western-blot检测,结果显示目的基因在pET-32a(+)中获得了高效融合表达,其表达蛋白相对分子质量约为60kDa,与虎源猫传染性鼻气管炎病毒阳性血清发生特异性反应.以纯化的表达产物作为包被抗原,建立了检测虎源猫传染性鼻气管炎抗体的间接ELISA检测方法.本实验为虎源性猫传染性鼻气管炎诊断试剂盒和基因亚单位疫苗的研究打下了重要的基础.
為研究虎源貓傳染性鼻氣管炎的快速診斷試劑盒和基因亞單位疫苗,根據Genbank公佈的貓傳染性鼻氣管炎病毒的覈痠序列,設計瞭關于虎源貓傳染性鼻氣管炎病毒gD蛋白基因的引物併利用PCR擴增齣gD序列,成功插入到pMD18-T Simple載體中,篩選穫得重組質粒,命名為pmd-gD.將其利用HindⅢ和Xho Ⅰ酶切後,產物剋隆入原覈錶達載體pet-32a(+)中,穫得重組質粒,命名pet-gD.用IPTG進行誘導錶達,收集菌液進行SDS-PAGE和Western-blot檢測,結果顯示目的基因在pET-32a(+)中穫得瞭高效融閤錶達,其錶達蛋白相對分子質量約為60kDa,與虎源貓傳染性鼻氣管炎病毒暘性血清髮生特異性反應.以純化的錶達產物作為包被抗原,建立瞭檢測虎源貓傳染性鼻氣管炎抗體的間接ELISA檢測方法.本實驗為虎源性貓傳染性鼻氣管炎診斷試劑盒和基因亞單位疫苗的研究打下瞭重要的基礎.
위연구호원묘전염성비기관염적쾌속진단시제합화기인아단위역묘,근거Genbank공포적묘전염성비기관염병독적핵산서렬,설계료관우호원묘전염성비기관염병독gD단백기인적인물병이용PCR확증출gD서렬,성공삽입도pMD18-T Simple재체중,사선획득중조질립,명명위pmd-gD.장기이용HindⅢ화Xho Ⅰ매절후,산물극륭입원핵표체재체pet-32a(+)중,획득중조질립,명명pet-gD.용IPTG진행유도표체,수집균액진행SDS-PAGE화Western-blot검측,결과현시목적기인재pET-32a(+)중획득료고효융합표체,기표체단백상대분자질량약위60kDa,여호원묘전염성비기관염병독양성혈청발생특이성반응.이순화적표체산물작위포피항원,건립료검측호원묘전염성비기관염항체적간접ELISA검측방법.본실험위호원성묘전염성비기관염진단시제합화기인아단위역묘적연구타하료중요적기출.
