医学研究杂志
醫學研究雜誌
의학연구잡지
JOURNAL OF MEDICAL RESEARCH
2014年
10期
63-67
,共5页
谭宽%张璇%马晓骊%黄秉仁%陈虹%陈等
譚寬%張璇%馬曉驪%黃秉仁%陳虹%陳等
담관%장선%마효려%황병인%진홍%진등
HRSP12%慢病毒载体%细胞凋亡
HRSP12%慢病毒載體%細胞凋亡
HRSP12%만병독재체%세포조망
HRSP12%Lentiviral vector%Cell apoptosis
目的 构建热反应蛋白12(heat-responsive protein 12,HRSP12)慢病毒表达载体pWPI-HRSP12,包装慢病毒颗粒并感染宫颈癌细胞HeLa,分析过表达的HRSP12对HeLa细胞凋亡和增殖的影响.方法 用反转录PCR扩增HRSP12全长编码顺序,构建慢病毒表达载体,利用人胚肾细胞HEK293T包装重组的慢病毒颗粒,感染HeLa细胞,用蛋白免疫印迹法检测剪切的半胱氨酸/天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)并用MTS比色法检测HeLa细胞增殖的情况.结果 编码全长HRSP12的cDNA片段为414bp,克隆至pWPI-linker载体成功构建了慢病毒表达载体pWPI-HRSP12,包装的慢病毒颗粒能够高效感染HeLa细胞,在细胞内表达Flag-HRSP12融合蛋白.HRSP12的过表达能够引起HeLa细胞caspase-3的剪切体增多,能够抑制HeLa细胞的增殖.结论 成功构建了慢病毒表达载体pWPI-HRSP12,初步结果表明,HRSP12可能具有诱导HeLa细胞凋亡、抑制细胞增殖的活性,为进一步研究HRSP12的生物学功能奠定了基础.
目的 構建熱反應蛋白12(heat-responsive protein 12,HRSP12)慢病毒錶達載體pWPI-HRSP12,包裝慢病毒顆粒併感染宮頸癌細胞HeLa,分析過錶達的HRSP12對HeLa細胞凋亡和增殖的影響.方法 用反轉錄PCR擴增HRSP12全長編碼順序,構建慢病毒錶達載體,利用人胚腎細胞HEK293T包裝重組的慢病毒顆粒,感染HeLa細胞,用蛋白免疫印跡法檢測剪切的半胱氨痠/天鼕氨痠蛋白水解酶-3(caspase-3)併用MTS比色法檢測HeLa細胞增殖的情況.結果 編碼全長HRSP12的cDNA片段為414bp,剋隆至pWPI-linker載體成功構建瞭慢病毒錶達載體pWPI-HRSP12,包裝的慢病毒顆粒能夠高效感染HeLa細胞,在細胞內錶達Flag-HRSP12融閤蛋白.HRSP12的過錶達能夠引起HeLa細胞caspase-3的剪切體增多,能夠抑製HeLa細胞的增殖.結論 成功構建瞭慢病毒錶達載體pWPI-HRSP12,初步結果錶明,HRSP12可能具有誘導HeLa細胞凋亡、抑製細胞增殖的活性,為進一步研究HRSP12的生物學功能奠定瞭基礎.
목적 구건열반응단백12(heat-responsive protein 12,HRSP12)만병독표체재체pWPI-HRSP12,포장만병독과립병감염궁경암세포HeLa,분석과표체적HRSP12대HeLa세포조망화증식적영향.방법 용반전록PCR확증HRSP12전장편마순서,구건만병독표체재체,이용인배신세포HEK293T포장중조적만병독과립,감염HeLa세포,용단백면역인적법검측전절적반광안산/천동안산단백수해매-3(caspase-3)병용MTS비색법검측HeLa세포증식적정황.결과 편마전장HRSP12적cDNA편단위414bp,극륭지pWPI-linker재체성공구건료만병독표체재체pWPI-HRSP12,포장적만병독과립능구고효감염HeLa세포,재세포내표체Flag-HRSP12융합단백.HRSP12적과표체능구인기HeLa세포caspase-3적전절체증다,능구억제HeLa세포적증식.결론 성공구건료만병독표체재체pWPI-HRSP12,초보결과표명,HRSP12가능구유유도HeLa세포조망、억제세포증식적활성,위진일보연구HRSP12적생물학공능전정료기출.
