医学研究杂志
醫學研究雜誌
의학연구잡지
JOURNAL OF MEDICAL RESEARCH
2014年
10期
53-58
,共6页
杨霞%张俊文%黄秉仁%陈虹
楊霞%張俊文%黃秉仁%陳虹
양하%장준문%황병인%진홍
IFN-λR1%TRAF6%NF-κB%ISRE%相互作用
IFN-λR1%TRAF6%NF-κB%ISRE%相互作用
IFN-λR1%TRAF6%NF-κB%ISRE%상호작용
IFN-λR1%TRAF6%NF-κB%ISRE%Interaction
目的 构建含有信号肽的全长IFN-λR1质粒,研究在配体IFN-λ1存在的情况下IFN-λR1与TRAF6的相互作用及对NF-κB与ISRE活性的影响.方法 利用多次PCR将信号肽编码序列引入IFN-λR1序列中,构建表达载体,用免疫荧光及膜蛋白分离实验鉴定IFN-λR1的表达定位.用免疫共沉淀的方法研究IFN-λ1刺激下IFN-λR1与TRAF6间的相互作用.用双荧光素酶报告基因实验研究IFN-λR1与TRAF6相互作用后对下游NF-κB与ISRE活性的影响,采用实时定量PCR的方法检测此种作用对OAS1与Mx1基因表达的影响.结果 成功构建了含信号肽的全长IFN-λR1表达载体,细胞内表达的IFN-λR1可正确定位于细胞膜上.细胞共转染IFN-λR1和TRAF6,在免疫沉淀物中可以检测到两个蛋白同时存在.细胞内共表达的IFN-λR1能够抑制TRAF6诱导的NF-λB的激活,而共表达的TRAF6可以抑制IFN-λR1下游ISRE的活性,并下调OAS1与Mx1基因的表达.结论 证实了在IFN-λ1存在下IFN-λR1与TRAF6的相互作用及二者相互作用对各自细胞信号转导通路的影响,为TRAF6作为IFN-λ受体信号通路中的相互作用蛋白提供了新的实验依据.
目的 構建含有信號肽的全長IFN-λR1質粒,研究在配體IFN-λ1存在的情況下IFN-λR1與TRAF6的相互作用及對NF-κB與ISRE活性的影響.方法 利用多次PCR將信號肽編碼序列引入IFN-λR1序列中,構建錶達載體,用免疫熒光及膜蛋白分離實驗鑒定IFN-λR1的錶達定位.用免疫共沉澱的方法研究IFN-λ1刺激下IFN-λR1與TRAF6間的相互作用.用雙熒光素酶報告基因實驗研究IFN-λR1與TRAF6相互作用後對下遊NF-κB與ISRE活性的影響,採用實時定量PCR的方法檢測此種作用對OAS1與Mx1基因錶達的影響.結果 成功構建瞭含信號肽的全長IFN-λR1錶達載體,細胞內錶達的IFN-λR1可正確定位于細胞膜上.細胞共轉染IFN-λR1和TRAF6,在免疫沉澱物中可以檢測到兩箇蛋白同時存在.細胞內共錶達的IFN-λR1能夠抑製TRAF6誘導的NF-λB的激活,而共錶達的TRAF6可以抑製IFN-λR1下遊ISRE的活性,併下調OAS1與Mx1基因的錶達.結論 證實瞭在IFN-λ1存在下IFN-λR1與TRAF6的相互作用及二者相互作用對各自細胞信號轉導通路的影響,為TRAF6作為IFN-λ受體信號通路中的相互作用蛋白提供瞭新的實驗依據.
목적 구건함유신호태적전장IFN-λR1질립,연구재배체IFN-λ1존재적정황하IFN-λR1여TRAF6적상호작용급대NF-κB여ISRE활성적영향.방법 이용다차PCR장신호태편마서렬인입IFN-λR1서렬중,구건표체재체,용면역형광급막단백분리실험감정IFN-λR1적표체정위.용면역공침정적방법연구IFN-λ1자격하IFN-λR1여TRAF6간적상호작용.용쌍형광소매보고기인실험연구IFN-λR1여TRAF6상호작용후대하유NF-κB여ISRE활성적영향,채용실시정량PCR적방법검측차충작용대OAS1여Mx1기인표체적영향.결과 성공구건료함신호태적전장IFN-λR1표체재체,세포내표체적IFN-λR1가정학정위우세포막상.세포공전염IFN-λR1화TRAF6,재면역침정물중가이검측도량개단백동시존재.세포내공표체적IFN-λR1능구억제TRAF6유도적NF-λB적격활,이공표체적TRAF6가이억제IFN-λR1하유ISRE적활성,병하조OAS1여Mx1기인적표체.결론 증실료재IFN-λ1존재하IFN-λR1여TRAF6적상호작용급이자상호작용대각자세포신호전도통로적영향,위TRAF6작위IFN-λ수체신호통로중적상호작용단백제공료신적실험의거.
