医学研究杂志
醫學研究雜誌
의학연구잡지
JOURNAL OF MEDICAL RESEARCH
2014年
10期
29-32
,共4页
任雪%程谟斌%张业%沈珝琲
任雪%程謨斌%張業%瀋珝琲
임설%정모빈%장업%침후배
人乳腺表皮细胞%雌激素受体配体结合结构域-Src融合蛋白%他莫西芬%细胞转化
人乳腺錶皮細胞%雌激素受體配體結閤結構域-Src融閤蛋白%他莫西芬%細胞轉化
인유선표피세포%자격소수체배체결합결구역-Src융합단백%타막서분%세포전화
Human mammary epithelial cells(MCF10A)%ER-Src%Tamoxifen%Cell transformation
目的 构建能够被他莫西芬(tamoxifen,TAM)激活的MCF10A-Er-Src诱导转化模型.方法 利用PCR扩增法分别获得雌激素受体配体结合结构域序列(hbER)和Src序列,并将其分别插入到改造后的反转录病毒表达载体pMSCV-FLAG-HA中,构建ER-Src融合蛋白表达质粒.包装pMSCV-ER-Src-FLAG-HA重组反转录病毒,感染MCF10A,利用基因组PCR和Western blot法筛选能够稳定表达外源融合蛋白ER-Src的细胞系.利用免疫沉淀(IP)和Western blot法验证TAM对稳转细胞系的激活,并观察细胞形态变化.结果 构建的MCF10A-Er-Src细胞系能够稳定表达ER-Src融合蛋白.TAM能诱使Src第416位酪氨酸发生磷酸化,从而激活Src,使MCF10A-Er-Src发生转化.结论 成功获得能够被TAM诱导激活的MCF10A-Er-Src转化模型.
目的 構建能夠被他莫西芬(tamoxifen,TAM)激活的MCF10A-Er-Src誘導轉化模型.方法 利用PCR擴增法分彆穫得雌激素受體配體結閤結構域序列(hbER)和Src序列,併將其分彆插入到改造後的反轉錄病毒錶達載體pMSCV-FLAG-HA中,構建ER-Src融閤蛋白錶達質粒.包裝pMSCV-ER-Src-FLAG-HA重組反轉錄病毒,感染MCF10A,利用基因組PCR和Western blot法篩選能夠穩定錶達外源融閤蛋白ER-Src的細胞繫.利用免疫沉澱(IP)和Western blot法驗證TAM對穩轉細胞繫的激活,併觀察細胞形態變化.結果 構建的MCF10A-Er-Src細胞繫能夠穩定錶達ER-Src融閤蛋白.TAM能誘使Src第416位酪氨痠髮生燐痠化,從而激活Src,使MCF10A-Er-Src髮生轉化.結論 成功穫得能夠被TAM誘導激活的MCF10A-Er-Src轉化模型.
목적 구건능구피타막서분(tamoxifen,TAM)격활적MCF10A-Er-Src유도전화모형.방법 이용PCR확증법분별획득자격소수체배체결합결구역서렬(hbER)화Src서렬,병장기분별삽입도개조후적반전록병독표체재체pMSCV-FLAG-HA중,구건ER-Src융합단백표체질립.포장pMSCV-ER-Src-FLAG-HA중조반전록병독,감염MCF10A,이용기인조PCR화Western blot법사선능구은정표체외원융합단백ER-Src적세포계.이용면역침정(IP)화Western blot법험증TAM대은전세포계적격활,병관찰세포형태변화.결과 구건적MCF10A-Er-Src세포계능구은정표체ER-Src융합단백.TAM능유사Src제416위락안산발생린산화,종이격활Src,사MCF10A-Er-Src발생전화.결론 성공획득능구피TAM유도격활적MCF10A-Er-Src전화모형.
