西北植物学报
西北植物學報
서북식물학보
ACTA BOTANICA BOREALI-OCCIDENTALIA SINICA
2014年
10期
1937-1943
,共7页
王玮%管利萍%张静%陈亮%李猛%侯岁稳
王瑋%管利萍%張靜%陳亮%李猛%侯歲穩
왕위%관리평%장정%진량%리맹%후세은
拟南芥%蛋白磷酸酶%TOPP4%多克隆抗体%抗体纯化
擬南芥%蛋白燐痠酶%TOPP4%多剋隆抗體%抗體純化
의남개%단백린산매%TOPP4%다극륭항체%항체순화
Arabidopsis%protein phosphatase%TOPP4%polyclonal antibodies%antibody purification
以拟南芥野生型Col-0为材料,对其Ⅰ型蛋白磷酸酶(TOPP)家族进行序列分析,对家族成员之一的TOPP4进行原核表达及多克隆抗体的制备和纯化.结果显示:(1)该研究构建出原核表达载体pEGM-4T-3-TOPP4和pET-28a-GFP-N150并转入大肠杆菌BL21(DE3)中.(2)经IPTG诱导,表达出分子量约为62 kD的GST-TOPP4和分子量约为34 kD的His-GFP-N150可溶性重组蛋白.(3)纯化的重组蛋白GST TOPP4作为抗原免疫新西兰兔后,获得了效价大于1∶400 000的多克隆抗体血清.(4)抗体血清经连接了His-GFP-N150蛋白的溴化氢活化的树脂纯化,得到特异性较高的anti-TOPP4多克隆抗体.研究认为,该研究纯化出了特异的TOPP4蛋白多克隆抗体.
以擬南芥野生型Col-0為材料,對其Ⅰ型蛋白燐痠酶(TOPP)傢族進行序列分析,對傢族成員之一的TOPP4進行原覈錶達及多剋隆抗體的製備和純化.結果顯示:(1)該研究構建齣原覈錶達載體pEGM-4T-3-TOPP4和pET-28a-GFP-N150併轉入大腸桿菌BL21(DE3)中.(2)經IPTG誘導,錶達齣分子量約為62 kD的GST-TOPP4和分子量約為34 kD的His-GFP-N150可溶性重組蛋白.(3)純化的重組蛋白GST TOPP4作為抗原免疫新西蘭兔後,穫得瞭效價大于1∶400 000的多剋隆抗體血清.(4)抗體血清經連接瞭His-GFP-N150蛋白的溴化氫活化的樹脂純化,得到特異性較高的anti-TOPP4多剋隆抗體.研究認為,該研究純化齣瞭特異的TOPP4蛋白多剋隆抗體.
이의남개야생형Col-0위재료,대기Ⅰ형단백린산매(TOPP)가족진행서렬분석,대가족성원지일적TOPP4진행원핵표체급다극륭항체적제비화순화.결과현시:(1)해연구구건출원핵표체재체pEGM-4T-3-TOPP4화pET-28a-GFP-N150병전입대장간균BL21(DE3)중.(2)경IPTG유도,표체출분자량약위62 kD적GST-TOPP4화분자량약위34 kD적His-GFP-N150가용성중조단백.(3)순화적중조단백GST TOPP4작위항원면역신서란토후,획득료효개대우1∶400 000적다극륭항체혈청.(4)항체혈청경련접료His-GFP-N150단백적추화경활화적수지순화,득도특이성교고적anti-TOPP4다극륭항체.연구인위,해연구순화출료특이적TOPP4단백다극륭항체.
