胃肠病学和肝病学杂志
胃腸病學和肝病學雜誌
위장병학화간병학잡지
CHINESE JOURNAL OF GASTROENTEROLOGY AND HEPATOLOGY
2014年
10期
1184-1186
,共3页
宋琳琳%卓萌%唐余燕%陈小华%余永胜%汤正好%臧国庆
宋琳琳%卓萌%唐餘燕%陳小華%餘永勝%湯正好%臧國慶
송림림%탁맹%당여연%진소화%여영성%탕정호%장국경
CTP%Ub%HBcAg%融合蛋白
CTP%Ub%HBcAg%融閤蛋白
CTP%Ub%HBcAg%융합단백
CTP%Ubiquitin%HBcAg%Fusion protein
目的 构建CTP-Ub-HBcAg原核表达载体并诱导和鉴定其融合蛋白的表达.方法 以质粒pcDNA3.1(-)-Ub-HBcAg中的Ub-HBcAg融合基因为模板设计引物,上游引物带有CTP基因序列,进行PCR扩增,PCR产物克隆到原核表达质粒pMAL-c2x中,菌落PCR阳性克隆测序鉴定,鉴定正确的质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达,并进一步通过直链淀粉树脂亲和层析法纯化融合蛋白,Western blotting鉴定.结果 PCR扩增得到820 bp大小的条带,为CTP-Ub-HBcAg融合序列.该序列被克隆至表达质粒pMAL-c2x中,阳性克隆菌落测序正确,并在DE3中获得诱导表达.Western blotting鉴定为70 KD的CTP-Ub-HBcA融合蛋白.结论 构建CTP-Ub-HBcAg原核表达载体并成功表达,为进一步研究该融合蛋白的功能提供了实验基础.
目的 構建CTP-Ub-HBcAg原覈錶達載體併誘導和鑒定其融閤蛋白的錶達.方法 以質粒pcDNA3.1(-)-Ub-HBcAg中的Ub-HBcAg融閤基因為模闆設計引物,上遊引物帶有CTP基因序列,進行PCR擴增,PCR產物剋隆到原覈錶達質粒pMAL-c2x中,菌落PCR暘性剋隆測序鑒定,鑒定正確的質粒轉化大腸桿菌BL21(DE3)誘導錶達,併進一步通過直鏈澱粉樹脂親和層析法純化融閤蛋白,Western blotting鑒定.結果 PCR擴增得到820 bp大小的條帶,為CTP-Ub-HBcAg融閤序列.該序列被剋隆至錶達質粒pMAL-c2x中,暘性剋隆菌落測序正確,併在DE3中穫得誘導錶達.Western blotting鑒定為70 KD的CTP-Ub-HBcA融閤蛋白.結論 構建CTP-Ub-HBcAg原覈錶達載體併成功錶達,為進一步研究該融閤蛋白的功能提供瞭實驗基礎.
목적 구건CTP-Ub-HBcAg원핵표체재체병유도화감정기융합단백적표체.방법 이질립pcDNA3.1(-)-Ub-HBcAg중적Ub-HBcAg융합기인위모판설계인물,상유인물대유CTP기인서렬,진행PCR확증,PCR산물극륭도원핵표체질립pMAL-c2x중,균락PCR양성극륭측서감정,감정정학적질립전화대장간균BL21(DE3)유도표체,병진일보통과직련정분수지친화층석법순화융합단백,Western blotting감정.결과 PCR확증득도820 bp대소적조대,위CTP-Ub-HBcAg융합서렬.해서렬피극륭지표체질립pMAL-c2x중,양성극륭균락측서정학,병재DE3중획득유도표체.Western blotting감정위70 KD적CTP-Ub-HBcA융합단백.결론 구건CTP-Ub-HBcAg원핵표체재체병성공표체,위진일보연구해융합단백적공능제공료실험기출.
