中国实验方剂学杂志
中國實驗方劑學雜誌
중국실험방제학잡지
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL TRADITIONAL MEDICAL FORMULAE
2014年
21期
95-99
,共5页
周雨晴%杜沛霖%傅鹏%谢峰%王跃峰%朱华
週雨晴%杜沛霖%傅鵬%謝峰%王躍峰%硃華
주우청%두패림%부붕%사봉%왕약봉%주화
青天葵%简单重复序列区间%体系优化%引物筛选
青天葵%簡單重複序列區間%體繫優化%引物篩選
청천규%간단중복서렬구간%체계우화%인물사선
Nerviliae fordii%inter-simple sequence repeat%optimization of reaction system%primers screening
目的:建立适合青天葵遗传差异分析的简单重复序列区间(ISSR)-聚合酶链式(PCR)反应体系.方法:采用正交试验设计对影响青天葵ISSR-PCR反应体系的5种因素(dNTP、模板DNA、引物、Mg2和Taq DNA聚合酶)4个水平进行优化,并结合新复极差法,对试验中各单因素进行分析.结果:确立了青天葵最佳反应体系,即在20μL的总反应体积中含有10×PCR buffer 2 μL,dNTP 225μmol·L-1,Mg2+ 2.5 mmol·L-1,引物0.4 μmol·L-1,TaqDNA聚合酶1.0U,模板DNA 60 ng;从100条引物中筛选出16条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物.结论:建立的青天葵ISSR-PCR反应体系,经过24份青天葵样品检验,得出该体系稳定可靠,可用于青天葵遗传差异分析.
目的:建立適閤青天葵遺傳差異分析的簡單重複序列區間(ISSR)-聚閤酶鏈式(PCR)反應體繫.方法:採用正交試驗設計對影響青天葵ISSR-PCR反應體繫的5種因素(dNTP、模闆DNA、引物、Mg2和Taq DNA聚閤酶)4箇水平進行優化,併結閤新複極差法,對試驗中各單因素進行分析.結果:確立瞭青天葵最佳反應體繫,即在20μL的總反應體積中含有10×PCR buffer 2 μL,dNTP 225μmol·L-1,Mg2+ 2.5 mmol·L-1,引物0.4 μmol·L-1,TaqDNA聚閤酶1.0U,模闆DNA 60 ng;從100條引物中篩選齣16條擴增穩定、多態性豐富的ISSR引物.結論:建立的青天葵ISSR-PCR反應體繫,經過24份青天葵樣品檢驗,得齣該體繫穩定可靠,可用于青天葵遺傳差異分析.
목적:건립괄합청천규유전차이분석적간단중복서렬구간(ISSR)-취합매련식(PCR)반응체계.방법:채용정교시험설계대영향청천규ISSR-PCR반응체계적5충인소(dNTP、모판DNA、인물、Mg2화Taq DNA취합매)4개수평진행우화,병결합신복겁차법,대시험중각단인소진행분석.결과:학립료청천규최가반응체계,즉재20μL적총반응체적중함유10×PCR buffer 2 μL,dNTP 225μmol·L-1,Mg2+ 2.5 mmol·L-1,인물0.4 μmol·L-1,TaqDNA취합매1.0U,모판DNA 60 ng;종100조인물중사선출16조확증은정、다태성봉부적ISSR인물.결론:건립적청천규ISSR-PCR반응체계,경과24빈청천규양품검험,득출해체계은정가고,가용우청천규유전차이분석.
