实验室科学
實驗室科學
실험실과학
LABORATORY SCIENCE
2014年
4期
72-76
,共5页
扩展青霉%脂肪酶%克隆
擴展青黴%脂肪酶%剋隆
확전청매%지방매%극륭
提取了扩展青霉Penicillium expansumTS414菌体的总RNA,并以反转录得到的cDNA为模板,成功扩增得到了脂肪酶基因;在此基础上,构建了重组表达载体pGEX-4T-1-PEL,并在大肠杆菌DH5α中实现了扩展青霉脂肪酶的表达;进一步采用低IPTG诱导浓度、低温、长时间的发酵策略等,使扩展青霉脂肪酶得以有活性的表达;同时,通过反复冻融细胞破碎法使其较好地从菌体细胞中分离出来,提取得到的酶液的活力达到0.49 U/mL.以上结果为后续脂肪酶分子进化等研究奠定了坚实的基础,亦可转化为高校或中学生物学实验教学的项目.
提取瞭擴展青黴Penicillium expansumTS414菌體的總RNA,併以反轉錄得到的cDNA為模闆,成功擴增得到瞭脂肪酶基因;在此基礎上,構建瞭重組錶達載體pGEX-4T-1-PEL,併在大腸桿菌DH5α中實現瞭擴展青黴脂肪酶的錶達;進一步採用低IPTG誘導濃度、低溫、長時間的髮酵策略等,使擴展青黴脂肪酶得以有活性的錶達;同時,通過反複凍融細胞破碎法使其較好地從菌體細胞中分離齣來,提取得到的酶液的活力達到0.49 U/mL.以上結果為後續脂肪酶分子進化等研究奠定瞭堅實的基礎,亦可轉化為高校或中學生物學實驗教學的項目.
제취료확전청매Penicillium expansumTS414균체적총RNA,병이반전록득도적cDNA위모판,성공확증득도료지방매기인;재차기출상,구건료중조표체재체pGEX-4T-1-PEL,병재대장간균DH5α중실현료확전청매지방매적표체;진일보채용저IPTG유도농도、저온、장시간적발효책략등,사확전청매지방매득이유활성적표체;동시,통과반복동융세포파쇄법사기교호지종균체세포중분리출래,제취득도적매액적활력체도0.49 U/mL.이상결과위후속지방매분자진화등연구전정료견실적기출,역가전화위고교혹중학생물학실험교학적항목.
