中国医科大学学报
中國醫科大學學報
중국의과대학학보
JOURNAL OF CHINA MEDICAL UNIVERSITY
2014年
7期
585-588
,共4页
熊建军%龚帧%周小鸥%王庭%刘建云%李卫东
熊建軍%龔幀%週小鷗%王庭%劉建雲%李衛東
웅건군%공정%주소구%왕정%류건운%리위동
IPO8%RUNX2%启动子%荧光素酶
IPO8%RUNX2%啟動子%熒光素酶
IPO8%RUNX2%계동자%형광소매
IPO8%RUNX2%promoter%luciferase
目的 研究转录因子RUNX2对IPO8基因启动子的调控作用.方法 基于PCR技术,分别突变和剔除IPO8基因启动子片段P-732/+ 134上RUNX2结合位点(-497～-502 bp),改造后的启动子片段定向插入荧光素酶表达载体PGL-3 Basic.重组质粒分别转染Saos-2与HeLa细胞,检测报告基因荧光素酶活性.应用染色质免疫共沉淀(ChIP)证实RUNX2与IPO8启动子在Saos-2细胞内结合.慢病毒介导RUNX2在Saos-2细胞的靶向沉默,定量PCR检测相应组别中IPO8 mRNA的表达.结果 成功突变和剔除IPO8启动子上RUNX2结合位点,破坏RUNX2结合位点导致IPO8启动子活性在Saos-2细胞中显著下降(P＜0.05) 转录因子RUNX2在Saos-2细胞与IPO8启动子有效结合,下调RUNX2的表达导致IPO8转录水平下降(P＜0.05).结论 转录因子RUNX2正性调控IPO8基因的转录.
目的 研究轉錄因子RUNX2對IPO8基因啟動子的調控作用.方法 基于PCR技術,分彆突變和剔除IPO8基因啟動子片段P-732/+ 134上RUNX2結閤位點(-497～-502 bp),改造後的啟動子片段定嚮插入熒光素酶錶達載體PGL-3 Basic.重組質粒分彆轉染Saos-2與HeLa細胞,檢測報告基因熒光素酶活性.應用染色質免疫共沉澱(ChIP)證實RUNX2與IPO8啟動子在Saos-2細胞內結閤.慢病毒介導RUNX2在Saos-2細胞的靶嚮沉默,定量PCR檢測相應組彆中IPO8 mRNA的錶達.結果 成功突變和剔除IPO8啟動子上RUNX2結閤位點,破壞RUNX2結閤位點導緻IPO8啟動子活性在Saos-2細胞中顯著下降(P＜0.05) 轉錄因子RUNX2在Saos-2細胞與IPO8啟動子有效結閤,下調RUNX2的錶達導緻IPO8轉錄水平下降(P＜0.05).結論 轉錄因子RUNX2正性調控IPO8基因的轉錄.
목적 연구전록인자RUNX2대IPO8기인계동자적조공작용.방법 기우PCR기술,분별돌변화척제IPO8기인계동자편단P-732/+ 134상RUNX2결합위점(-497～-502 bp),개조후적계동자편단정향삽입형광소매표체재체PGL-3 Basic.중조질립분별전염Saos-2여HeLa세포,검측보고기인형광소매활성.응용염색질면역공침정(ChIP)증실RUNX2여IPO8계동자재Saos-2세포내결합.만병독개도RUNX2재Saos-2세포적파향침묵,정량PCR검측상응조별중IPO8 mRNA적표체.결과 성공돌변화척제IPO8계동자상RUNX2결합위점,파배RUNX2결합위점도치IPO8계동자활성재Saos-2세포중현저하강(P＜0.05) 전록인자RUNX2재Saos-2세포여IPO8계동자유효결합,하조RUNX2적표체도치IPO8전록수평하강(P＜0.05).결론 전록인자RUNX2정성조공IPO8기인적전록.
