功能与分子医学影像学杂志（电子版）
功能與分子醫學影像學雜誌（電子版）
공능여분자의학영상학잡지（전자판）
Functional and Molecular Medical Imaging(Electronic Edition)
2014年
2期
16-20
,共5页
李天然%周军%杜湘珂%魏正茂%霍天龙
李天然%週軍%杜湘珂%魏正茂%霍天龍
리천연%주군%두상가%위정무%곽천룡
髓间充质干细胞%高转移潜能肝癌细胞%肿瘤生长因子%细胞程序化凋亡因子4%整合素
髓間充質榦細胞%高轉移潛能肝癌細胞%腫瘤生長因子%細胞程序化凋亡因子4%整閤素
수간충질간세포%고전이잠능간암세포%종류생장인자%세포정서화조망인자4%정합소
目的 观察经TGF-β1基因修饰的人骨髓间充质干细胞(hMSC)对高转移潜能肝癌细胞(MHCC97-H)增殖能力及侵袭能力的影响.方法 ①利用Gateway Technology法构建TGF-β1慢病毒载体,eGFP为报告基因,转染hMSC,病毒滴度测定转染率;②Transwell法检测hMSC与肝癌细胞共培养实验,下室加入500μl含20％FBS的培养基和1×104个基因修饰前后hMSC,上室加入100μl浓度为1×106个/ml的人高转移肝癌细胞(MHCC97-H)悬液,小室置于37℃,5％CO2培养箱内培养48 h,结晶紫染色,细胞计数,检测MHCC97-H细胞侵袭能力的变化;③CCK-8法检测与hMSC共培养前后MHCC97-H增殖能力的变化;④PCR法检测转基因hMSC与MHCC97-H细胞共培养前后转移相关因子基因α-V,肿瘤生长因子TGF-β1和肿瘤凋亡因子PDCD4等基因表达.结果 (1)hMSC TGF-β1过表达组细胞的转导率达90％以上.(2) MHCC97-H细胞增殖能力检测结果:①MHCC97-H与hMSC细胞共培养后,MHCC97-H增殖能力增强;②hMSC TGF-β1基因过表达组对MHCC97-H细胞增殖具有抑制作用.(3)MHCC97-H细胞侵袭能力检测结果:①MHCC97-H与hMSC细胞共培养后,侵袭能力增强;②hMSC TGF-β1基因过表达组对MHCC97-H细胞侵袭能力具有明显的抑制作用.(4) Q-PCR检测结果:①hMSC基因转染组TGF-β1表达明显增高;②hMSC基因转染共培养组MHCC97-H细胞TGF-β1基因表达明显低于对照组;③hMSC基因转染共培养组MHCC97-H细胞α5基因表达降低;④hMSC基因转染共培养组MHCC97-H细胞PDCD4基因表达降低.结论 TGF-β1基因hMSC过表达组细胞MHCC97-H细胞的转导率达90％以上;转基因hMSC具有抑制MHCC97-H细胞增殖和细胞侵袭的作用.
目的 觀察經TGF-β1基因脩飾的人骨髓間充質榦細胞(hMSC)對高轉移潛能肝癌細胞(MHCC97-H)增殖能力及侵襲能力的影響.方法 ①利用Gateway Technology法構建TGF-β1慢病毒載體,eGFP為報告基因,轉染hMSC,病毒滴度測定轉染率;②Transwell法檢測hMSC與肝癌細胞共培養實驗,下室加入500μl含20％FBS的培養基和1×104箇基因脩飾前後hMSC,上室加入100μl濃度為1×106箇/ml的人高轉移肝癌細胞(MHCC97-H)懸液,小室置于37℃,5％CO2培養箱內培養48 h,結晶紫染色,細胞計數,檢測MHCC97-H細胞侵襲能力的變化;③CCK-8法檢測與hMSC共培養前後MHCC97-H增殖能力的變化;④PCR法檢測轉基因hMSC與MHCC97-H細胞共培養前後轉移相關因子基因α-V,腫瘤生長因子TGF-β1和腫瘤凋亡因子PDCD4等基因錶達.結果 (1)hMSC TGF-β1過錶達組細胞的轉導率達90％以上.(2) MHCC97-H細胞增殖能力檢測結果:①MHCC97-H與hMSC細胞共培養後,MHCC97-H增殖能力增彊;②hMSC TGF-β1基因過錶達組對MHCC97-H細胞增殖具有抑製作用.(3)MHCC97-H細胞侵襲能力檢測結果:①MHCC97-H與hMSC細胞共培養後,侵襲能力增彊;②hMSC TGF-β1基因過錶達組對MHCC97-H細胞侵襲能力具有明顯的抑製作用.(4) Q-PCR檢測結果:①hMSC基因轉染組TGF-β1錶達明顯增高;②hMSC基因轉染共培養組MHCC97-H細胞TGF-β1基因錶達明顯低于對照組;③hMSC基因轉染共培養組MHCC97-H細胞α5基因錶達降低;④hMSC基因轉染共培養組MHCC97-H細胞PDCD4基因錶達降低.結論 TGF-β1基因hMSC過錶達組細胞MHCC97-H細胞的轉導率達90％以上;轉基因hMSC具有抑製MHCC97-H細胞增殖和細胞侵襲的作用.
목적 관찰경TGF-β1기인수식적인골수간충질간세포(hMSC)대고전이잠능간암세포(MHCC97-H)증식능력급침습능력적영향.방법 ①이용Gateway Technology법구건TGF-β1만병독재체,eGFP위보고기인,전염hMSC,병독적도측정전염솔;②Transwell법검측hMSC여간암세포공배양실험,하실가입500μl함20％FBS적배양기화1×104개기인수식전후hMSC,상실가입100μl농도위1×106개/ml적인고전이간암세포(MHCC97-H)현액,소실치우37℃,5％CO2배양상내배양48 h,결정자염색,세포계수,검측MHCC97-H세포침습능력적변화;③CCK-8법검측여hMSC공배양전후MHCC97-H증식능력적변화;④PCR법검측전기인hMSC여MHCC97-H세포공배양전후전이상관인자기인α-V,종류생장인자TGF-β1화종류조망인자PDCD4등기인표체.결과 (1)hMSC TGF-β1과표체조세포적전도솔체90％이상.(2) MHCC97-H세포증식능력검측결과:①MHCC97-H여hMSC세포공배양후,MHCC97-H증식능력증강;②hMSC TGF-β1기인과표체조대MHCC97-H세포증식구유억제작용.(3)MHCC97-H세포침습능력검측결과:①MHCC97-H여hMSC세포공배양후,침습능력증강;②hMSC TGF-β1기인과표체조대MHCC97-H세포침습능력구유명현적억제작용.(4) Q-PCR검측결과:①hMSC기인전염조TGF-β1표체명현증고;②hMSC기인전염공배양조MHCC97-H세포TGF-β1기인표체명현저우대조조;③hMSC기인전염공배양조MHCC97-H세포α5기인표체강저;④hMSC기인전염공배양조MHCC97-H세포PDCD4기인표체강저.결론 TGF-β1기인hMSC과표체조세포MHCC97-H세포적전도솔체90％이상;전기인hMSC구유억제MHCC97-H세포증식화세포침습적작용.
