植物病理学报
植物病理學報
식물병이학보
ACTA PHYTOPATHOLOGICA SINICA
2014年
2期
156-162
,共7页
王清海%金莹%万平平%韩玉梅%李安娜%丁爱云
王清海%金瑩%萬平平%韓玉梅%李安娜%丁愛雲
왕청해%금형%만평평%한옥매%리안나%정애운
链霉菌%β-葡萄糖苷酶%纯化%特性%酶解产物
鏈黴菌%β-葡萄糖苷酶%純化%特性%酶解產物
련매균%β-포도당감매%순화%특성%매해산물
Streptomyces%β-glucosidase%purification%characteristics%enzyme reaction
从山东泰安郊区大白菜植株根际土壤中分离筛选获得一株拮抗链霉菌(Streptomyces spp.)R15菌株.采用固体发酵、粗酶液(NH4)2SO4分级沉淀、DEAE-52阴离子交换柱层析和Sephadex G75凝胶柱层析等步骤从链霉菌(Streptomyce spp.) R15中分离纯化获得β-葡萄糖苷酶.结果表明,纯化倍数16.28,回收率为14.59％,SDS-PAGE电泳测得相对分子量为63.89 kDa.经TLC分析酶解产物,β-葡萄糖苷酶与水杨苷反应生成D-葡萄糖和水杨醇.以水杨苷为底物时,该酶的Km值为10.644 mmol/L,Vmax为0.525 μmol·L-1·min-1.该酶的最适温度为65℃,70℃以下相对稳定;最适pH为5,pH3～7之间相对酶活在75％以上.Cu2+、Hg2+和Fe2+对酶有抑制作用,其中Hg2+和Cu2+的抑制作用最强,酶活力完全丧失;而Ca2+,Mn2+对酶均有激活作用,相对酶活分别高达137.18％和119.52％.
從山東泰安郊區大白菜植株根際土壤中分離篩選穫得一株拮抗鏈黴菌(Streptomyces spp.)R15菌株.採用固體髮酵、粗酶液(NH4)2SO4分級沉澱、DEAE-52陰離子交換柱層析和Sephadex G75凝膠柱層析等步驟從鏈黴菌(Streptomyce spp.) R15中分離純化穫得β-葡萄糖苷酶.結果錶明,純化倍數16.28,迴收率為14.59％,SDS-PAGE電泳測得相對分子量為63.89 kDa.經TLC分析酶解產物,β-葡萄糖苷酶與水楊苷反應生成D-葡萄糖和水楊醇.以水楊苷為底物時,該酶的Km值為10.644 mmol/L,Vmax為0.525 μmol·L-1·min-1.該酶的最適溫度為65℃,70℃以下相對穩定;最適pH為5,pH3～7之間相對酶活在75％以上.Cu2+、Hg2+和Fe2+對酶有抑製作用,其中Hg2+和Cu2+的抑製作用最彊,酶活力完全喪失;而Ca2+,Mn2+對酶均有激活作用,相對酶活分彆高達137.18％和119.52％.
종산동태안교구대백채식주근제토양중분리사선획득일주길항련매균(Streptomyces spp.)R15균주.채용고체발효、조매액(NH4)2SO4분급침정、DEAE-52음리자교환주층석화Sephadex G75응효주층석등보취종련매균(Streptomyce spp.) R15중분리순화획득β-포도당감매.결과표명,순화배수16.28,회수솔위14.59％,SDS-PAGE전영측득상대분자량위63.89 kDa.경TLC분석매해산물,β-포도당감매여수양감반응생성D-포도당화수양순.이수양감위저물시,해매적Km치위10.644 mmol/L,Vmax위0.525 μmol·L-1·min-1.해매적최괄온도위65℃,70℃이하상대은정;최괄pH위5,pH3～7지간상대매활재75％이상.Cu2+、Hg2+화Fe2+대매유억제작용,기중Hg2+화Cu2+적억제작용최강,매활력완전상실;이Ca2+,Mn2+대매균유격활작용,상대매활분별고체137.18％화119.52％.
