CAJ | 학술논문

目的:本研究旨在观察Ca2+荧光蛋白探针Cameleon和荧光染料探针fluo-3在H2O2刺激的A549细胞中的应用,实时测定细胞质Ca2+浓度([Ca2+]i),并比较两种Ca2+探针在荧光曲线及[Ca2+]i测定值等方面的差异.方法:采用Ca2+荧光蛋白探针Cameleon YC3.6转染A549细胞,24h后用50mmol/L H2O2刺激细胞,激光扫描共聚焦显微镜实时测定选取细胞的[Ca2+]i变化.采用Ca2+荧光染料探针fluo-3负载细胞,1h后用50mmol/L H2O2刺激细胞,激光扫描共聚焦显微镜实时测定选取细胞的[Ca2+]i变化.采用DAPI染色试剂盒观察H2O2刺激后细胞凋亡情况.结果:采用Cameleon探针转染的细胞中,反映[Ca2+]i变化的R值曲线迅速升高后逐渐降至刺激前水平,通过公式计算发现[Ca2+]i变化范围是33.1-596.1 nmol/L.采用fluo-3探针负载的细胞中,反映[Ca2+]i变化的荧光强度F值曲线逐渐升高至稳定,通过公式计算得到[Ca2+]i变化范围是131.8-695.6 nmol/L.同时发现经H2O2刺激后,凋亡细胞百分比显著增加(P＜0.01).结论:Ca2+荧光蛋白探针Cameleon YC3.6和荧光染料探针fluo-3均检测到H2O2诱导的细胞内[Ca2+]i变化,Cameleon YC3.6可能更灵敏地反映快速变化的钙信号.
목적:본연구지재관찰Ca2+형광단백탐침Cameleon화형광염료탐침fluo-3재H2O2자격적A549세포중적응용,실시측정세포질Ca2+농도([Ca2+]i),병비교량충Ca2+탐침재형광곡선급[Ca2+]i측정치등방면적차이.방법:채용Ca2+형광단백탐침Cameleon YC3.6전염A549세포,24h후용50mmol/L H2O2자격세포,격광소묘공취초현미경실시측정선취세포적[Ca2+]i변화.채용Ca2+형광염료탐침fluo-3부재세포,1h후용50mmol/L H2O2자격세포,격광소묘공취초현미경실시측정선취세포적[Ca2+]i변화.채용DAPI염색시제합관찰H2O2자격후세포조망정황.결과:채용Cameleon탐침전염적세포중,반영[Ca2+]i변화적R치곡선신속승고후축점강지자격전수평,통과공식계산발현[Ca2+]i변화범위시33.1-596.1 nmol/L.채용fluo-3탐침부재적세포중,반영[Ca2+]i변화적형광강도F치곡선축점승고지은정,통과공식계산득도[Ca2+]i변화범위시131.8-695.6 nmol/L.동시발현경H2O2자격후,조망세포백분비현저증가(P＜0.01).결론:Ca2+형광단백탐침Cameleon YC3.6화형광염료탐침fluo-3균검측도H2O2유도적세포내[Ca2+]i변화,Cameleon YC3.6가능경령민지반영쾌속변화적개신호.