重组牛分枝杆菌CFP-10蛋白间接ELISA检测方法的建立
중조우분지간균CFP-10단백간접ELISA검측방법적건립
Development of an indirect ELISA using the recombinant culture filter protein 10 from Mycobacterium bovis
  • 万方数据
    南方农业学报 남방농업학보
    GUANGXI AGRICULTURAL SCIENCES
    2014年 7期 1291-1295 ,共5页

    谢志勤%谢芝勋%刘加波%庞耀珊%邓显文%谢丽基%范晴%罗思思%牟群

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    牛分枝杆菌%CFP-10蛋白%间接ELISA%阴阳临界值 牛分枝桿菌%CFP-10蛋白%間接ELISA%陰暘臨界值
    우분지간균%CFP-10단백%간접ELISA%음양림계치
    Mycobacterium bovis (M.bovis)%recombinant CFP-10 protein%indirect ELISA%critical value
    [目的]建立检测牛分枝杆菌的间接ELISA方法,快速区分致病性与非致病性牛分枝杆菌,为净化牛结核病提供技术支撑.[方法]以体外扩增表达并纯化的重组牛分枝杆菌CFP-10蛋白为包被抗原,建立检测牛分枝杆菌的间接ELISA,并应用方阵法优化间接ELISA的检测条件.[结果]重组CFP-10蛋白间接ELISA的最佳检测条件为:以8μg/mL重组CFP-10蛋白包为被抗原,37℃下包被1h,再以5％脱脂奶封闭1h,血清(一抗)经1∶200倍稀释后作用1h,然后以1:500倍稀释的辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG(二抗)作用1h.该间接ELISA的阴阳临界值为0.281,仅与牛分枝杆菌呈阳性反应,与牛布鲁氏杆菌、牛口蹄疫病毒无交叉反应;其敏感性能检测1:320倍稀释的血清,批内与批间的变异系数均小于5.0％.[结论]建立的重组牛分枝杆菌CFP-10蛋白间接ELISA具有特异、敏感等优点,临床上可用于致病性牛分枝杆菌的检测.
    [목적]건립검측우분지간균적간접ELISA방법,쾌속구분치병성여비치병성우분지간균,위정화우결핵병제공기술지탱.[방법]이체외확증표체병순화적중조우분지간균CFP-10단백위포피항원,건립검측우분지간균적간접ELISA,병응용방진법우화간접ELISA적검측조건.[결과]중조CFP-10단백간접ELISA적최가검측조건위:이8μg/mL중조CFP-10단백포위피항원,37℃하포피1h,재이5％탈지내봉폐1h,혈청(일항)경1∶200배희석후작용1h,연후이1:500배희석적랄근과양화물매표기양항토IgG(이항)작용1h.해간접ELISA적음양림계치위0.281,부여우분지간균정양성반응,여우포로씨간균、우구제역병독무교차반응;기민감성능검측1:320배희석적혈청,비내여비간적변이계수균소우5.0％.[결론]건립적중조우분지간균CFP-10단백간접ELISA구유특이、민감등우점,림상상가용우치병성우분지간균적검측.
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