南方农业学报
南方農業學報
남방농업학보
GUANGXI AGRICULTURAL SCIENCES
2014年
7期
1137-1146
,共10页
毕政鸿%李哲%王志秋%戴雪梅%方家林%黄华孙%林位夫%LARDET Ludovic%MONTORO Pascal
畢政鴻%李哲%王誌鞦%戴雪梅%方傢林%黃華孫%林位伕%LARDET Ludovic%MONTORO Pascal
필정홍%리철%왕지추%대설매%방가림%황화손%림위부%LARDET Ludovic%MONTORO Pascal
橡胶树%农杆菌介导的遗传转化%AtMYB118基因%反转录PCR%易碎胚性愈伤组织%转基因植株
橡膠樹%農桿菌介導的遺傳轉化%AtMYB118基因%反轉錄PCR%易碎胚性愈傷組織%轉基因植株
상효수%농간균개도적유전전화%AtMYB118기인%반전록PCR%역쇄배성유상조직%전기인식주
Hevea brasiliensis%Agrobacterium-mediated genetic transformation%AtMYB118 gene%RT-PCR%friable embryogenic calli%transgenic plantlets
[目的]采用正交设计L25(56)优化农杆菌介导的AtMYB118基因对橡胶树易碎胚性愈伤组织的遗传转化体系,为橡胶树品种遗传改良提供参考.[方法]以75.0 mg/L卡那霉素筛选经过转化的愈伤组织;采用GUS瞬时表达检测方法评价6个因素即预培养时间、农杆菌菌液浓度(OD600)、乙酰丁香酮(AS)浓度、侵染时间、共培养温度和共培养时间对遗传转化的影响.[结果]6个因素显著影响橡胶树长期培养的易碎胚性愈伤组织的转化频率,易碎胚性愈伤组织遗传转化优化条件为:预培养0d,菌液OD600为0.7,侵染时间7 min,共培养时间5d,AS 200 μmol/L,共培养温度25℃.在此优化条件下可获得最高转化频率.经过4～6个月的筛选,获得17个GUS染色阳性的易碎愈伤组织系.经PCR和反转录PCR分析转化愈伤组织,进一步证实uidA、nptⅡ、AtMYB118基因已被整合到愈伤组织基因组中并表达.培养获得1539个胚状体,其中164个为转基因胚状体,转化频率为10.6％;最终获得4株转AtMYB118基因植株.[结论]优化获得可行有效的橡胶树易碎胚性愈伤组织遗传转化体系,可为其品种遗传改良提供技术支持.
[目的]採用正交設計L25(56)優化農桿菌介導的AtMYB118基因對橡膠樹易碎胚性愈傷組織的遺傳轉化體繫,為橡膠樹品種遺傳改良提供參攷.[方法]以75.0 mg/L卡那黴素篩選經過轉化的愈傷組織;採用GUS瞬時錶達檢測方法評價6箇因素即預培養時間、農桿菌菌液濃度(OD600)、乙酰丁香酮(AS)濃度、侵染時間、共培養溫度和共培養時間對遺傳轉化的影響.[結果]6箇因素顯著影響橡膠樹長期培養的易碎胚性愈傷組織的轉化頻率,易碎胚性愈傷組織遺傳轉化優化條件為:預培養0d,菌液OD600為0.7,侵染時間7 min,共培養時間5d,AS 200 μmol/L,共培養溫度25℃.在此優化條件下可穫得最高轉化頻率.經過4～6箇月的篩選,穫得17箇GUS染色暘性的易碎愈傷組織繫.經PCR和反轉錄PCR分析轉化愈傷組織,進一步證實uidA、nptⅡ、AtMYB118基因已被整閤到愈傷組織基因組中併錶達.培養穫得1539箇胚狀體,其中164箇為轉基因胚狀體,轉化頻率為10.6％;最終穫得4株轉AtMYB118基因植株.[結論]優化穫得可行有效的橡膠樹易碎胚性愈傷組織遺傳轉化體繫,可為其品種遺傳改良提供技術支持.
[목적]채용정교설계L25(56)우화농간균개도적AtMYB118기인대상효수역쇄배성유상조직적유전전화체계,위상효수품충유전개량제공삼고.[방법]이75.0 mg/L잡나매소사선경과전화적유상조직;채용GUS순시표체검측방법평개6개인소즉예배양시간、농간균균액농도(OD600)、을선정향동(AS)농도、침염시간、공배양온도화공배양시간대유전전화적영향.[결과]6개인소현저영향상효수장기배양적역쇄배성유상조직적전화빈솔,역쇄배성유상조직유전전화우화조건위:예배양0d,균액OD600위0.7,침염시간7 min,공배양시간5d,AS 200 μmol/L,공배양온도25℃.재차우화조건하가획득최고전화빈솔.경과4～6개월적사선,획득17개GUS염색양성적역쇄유상조직계.경PCR화반전록PCR분석전화유상조직,진일보증실uidA、nptⅡ、AtMYB118기인이피정합도유상조직기인조중병표체.배양획득1539개배상체,기중164개위전기인배상체,전화빈솔위10.6％;최종획득4주전AtMYB118기인식주.[결론]우화획득가행유효적상효수역쇄배성유상조직유전전화체계,가위기품충유전개량제공기술지지.
