中国抗生素杂志
中國抗生素雜誌
중국항생소잡지
CHINESE JOURNAL OF ANTIBIOTICS
2014年
8期
620-624
,共5页
梁树梅%何云燕%夏云%王慧娟%王立朋
樑樹梅%何雲燕%夏雲%王慧娟%王立朋
량수매%하운연%하운%왕혜연%왕립붕
鲍曼不动杆菌%gyrA%斑点杂交%反义寡核苷酸%肽核酸
鮑曼不動桿菌%gyrA%斑點雜交%反義寡覈苷痠%肽覈痠
포만불동간균%gyrA%반점잡교%반의과핵감산%태핵산
Acinetobacter baumannii%gyrA%Dot blot hybridization%Antisense oligonucleotides%Peptide nucleic acid
目的 体外斑点杂交实验模拟体内环境验证计算机辅助软件设计的反义寡核苷酸序列的活性.方法 采用计算机辅助软件对多重耐药鲍曼不动杆菌生长必须基因gyrA的mRNA进行二级结构分析计算,设计出10条反义寡核苷酸序列,合成探针与体外转录并用地高辛标记的gyrA mRNA进行斑点杂交,分别选择一条杂交信号最强和一条杂交信号弱的探针序列合成连接穿膜肽序列的肽-肽核酸,以不同浓度的肽-肽核酸处理鲍曼不动杆菌标准株ATCC 19606和多重耐药株,测定经不同浓度PPNA处理的细菌光密度A600值并进行平板菌落计数,观察其对细菌生长的抑制作用.以20μmol/L杂交信号强的肽-肽核酸作用于铜绿假单胞菌,测细菌光密度A600值,观察其对细菌生长的抑制作用.结果 杂交信号强的肽-肽核酸对多重耐药的鲍曼不动杆菌和ATCC 19606均有明显的体外抗菌活性,其最低抑菌浓度分别为5与10μmol/L,10μmol/L浓度时对两种细菌均具有杀菌活性,而杂交信号弱的肽-肽核酸对细菌的生长无抑制作用,即使将其浓度增加到20μmol/L.杂交信号强的肽-肽核酸对铜绿假单胞菌无生长抑制作用.结论 体外斑点杂交实验能够验证计算机软件预测设计的具有特异性的反义核酸的活性,为体外可靠、快速、高通量筛选高效反义序列提供了一种有效的方法,并且为筛选所有基因高效反义序列搭建了一个平台.
目的 體外斑點雜交實驗模擬體內環境驗證計算機輔助軟件設計的反義寡覈苷痠序列的活性.方法 採用計算機輔助軟件對多重耐藥鮑曼不動桿菌生長必鬚基因gyrA的mRNA進行二級結構分析計算,設計齣10條反義寡覈苷痠序列,閤成探針與體外轉錄併用地高辛標記的gyrA mRNA進行斑點雜交,分彆選擇一條雜交信號最彊和一條雜交信號弱的探針序列閤成連接穿膜肽序列的肽-肽覈痠,以不同濃度的肽-肽覈痠處理鮑曼不動桿菌標準株ATCC 19606和多重耐藥株,測定經不同濃度PPNA處理的細菌光密度A600值併進行平闆菌落計數,觀察其對細菌生長的抑製作用.以20μmol/L雜交信號彊的肽-肽覈痠作用于銅綠假單胞菌,測細菌光密度A600值,觀察其對細菌生長的抑製作用.結果 雜交信號彊的肽-肽覈痠對多重耐藥的鮑曼不動桿菌和ATCC 19606均有明顯的體外抗菌活性,其最低抑菌濃度分彆為5與10μmol/L,10μmol/L濃度時對兩種細菌均具有殺菌活性,而雜交信號弱的肽-肽覈痠對細菌的生長無抑製作用,即使將其濃度增加到20μmol/L.雜交信號彊的肽-肽覈痠對銅綠假單胞菌無生長抑製作用.結論 體外斑點雜交實驗能夠驗證計算機軟件預測設計的具有特異性的反義覈痠的活性,為體外可靠、快速、高通量篩選高效反義序列提供瞭一種有效的方法,併且為篩選所有基因高效反義序列搭建瞭一箇平檯.
목적 체외반점잡교실험모의체내배경험증계산궤보조연건설계적반의과핵감산서렬적활성.방법 채용계산궤보조연건대다중내약포만불동간균생장필수기인gyrA적mRNA진행이급결구분석계산,설계출10조반의과핵감산서렬,합성탐침여체외전록병용지고신표기적gyrA mRNA진행반점잡교,분별선택일조잡교신호최강화일조잡교신호약적탐침서렬합성련접천막태서렬적태-태핵산,이불동농도적태-태핵산처리포만불동간균표준주ATCC 19606화다중내약주,측정경불동농도PPNA처리적세균광밀도A600치병진행평판균락계수,관찰기대세균생장적억제작용.이20μmol/L잡교신호강적태-태핵산작용우동록가단포균,측세균광밀도A600치,관찰기대세균생장적억제작용.결과 잡교신호강적태-태핵산대다중내약적포만불동간균화ATCC 19606균유명현적체외항균활성,기최저억균농도분별위5여10μmol/L,10μmol/L농도시대량충세균균구유살균활성,이잡교신호약적태-태핵산대세균적생장무억제작용,즉사장기농도증가도20μmol/L.잡교신호강적태-태핵산대동록가단포균무생장억제작용.결론 체외반점잡교실험능구험증계산궤연건예측설계적구유특이성적반의핵산적활성,위체외가고、쾌속、고통량사선고효반의서렬제공료일충유효적방법,병차위사선소유기인고효반의서렬탑건료일개평태.
