CAJ | 학술논문

目的探讨miR-20b过表达对P19细胞增殖和细胞分化的影响.方法将包含鼠miR-20b成熟序列的慢病毒载体及空载体分别感染P19细胞,通过嘌呤霉素筛选2周,建立稳定过表达鼠mR-20b的P19细胞系.用Real-time PCR的方法验证稳定细胞表达株.用CCK-8方法检测稳定感染miR-20b过表达慢病毒和空载体的P19细胞间细胞增殖的差别.将稳定感染的两组细胞以无血清培养液37℃孵育24小时使细胞停留于GO期,而后恢复血清培养,取不同时间点的细胞,使用流式细胞仪检测两组间细胞周期的差别,从而间接验证CCK-8的结果.以1％二甲基亚砜(DMSO)将两组稳定感染的P19细胞诱导分化为心肌细胞,Real-time PCR检测心肌分化相关标志基因的表达,并用光镜观察分化过程中的形态变化.结果建立了稳定表达miR-20b的P19细胞系,与空载体组相比,miR-20b过表达可抑制P19细胞的增殖,促进心肌分化相关标志基因的表达(P ＜0.05,P＜0.01或P＜0.001).结论 miR-20b过表达可显著抑制P19细胞的增殖,并具有促进P19细胞向心肌细胞分化的作用.
목적 탐토miR-20b과표체대P19세포증식화세포분화적영향.방법 장포함서miR-20b성숙서렬적만병독재체급공재체분별감염P19세포,통과표령매소사선2주,건립은정과표체서mR-20b적P19세포계.용Real-time PCR적방법험증은정세포표체주.용CCK-8방법검측은정감염miR-20b과표체만병독화공재체적P19세포간세포증식적차별.장은정감염적량조세포이무혈청배양액37℃부육24소시사세포정류우GO기,이후회복혈청배양,취불동시간점적세포,사용류식세포의검측량조간세포주기적차별,종이간접험증CCK-8적결과.이1％이갑기아풍(DMSO)장량조은정감염적P19세포유도분화위심기세포,Real-time PCR검측심기분화상관표지기인적표체,병용광경관찰분화과정중적형태변화.결과 건립료은정표체miR-20b적P19세포계,여공재체조상비,miR-20b과표체가억제P19세포적증식,촉진심기분화상관표지기인적표체(P ＜0.05,P＜0.01혹P＜0.001).결론 miR-20b과표체가현저억제P19세포적증식,병구유촉진P19세포향심기세포분화적작용.