CAJ | 학술논문

本试验旨在研究饲粮叶酸水平对种鸡子代胚胎期肝脏脂代谢相关基因表达及其甲基化的影响.试验选用120日龄体重相近的北京油鸡90只随机分为3组(每组30个重复,每个重复1只),单笼饲养,分别饲喂在玉米-豆粕型基础饲粮(叶酸含量0.53 mg/kg)中添加0(对照组)、2.5、5.0 mg/kg叶酸的试验饲粮,常规笼养90 d.于产蛋高峰期收集种蛋孵化,子代分别于16胚龄、19胚龄和1日龄时取肝脏组织.采用放射免疫的方法检测种蛋及饲粮叶酸含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测子代胚胎期肝脏脂肪合成关键基因mRNA的表达水平;重亚硫酸盐修饰直接测序法(BSP)和半巢式聚合酶链式反应检测肝脏固醇类调节元件结合蛋白(SREBP-1c)启动子区域(-789～-466 bp)及脂肪酸合成酶(FAS)启动子区域(-159～+143 bp)的甲基化程度.结果表明:饲粮添加2.5 mg/kg叶酸使得种蛋中叶酸沉积比对照组增加了81.92％ (P＜0.05).SREBP-1c基因表达水平随胚龄的增加呈上调的趋势,而其核心启动子区域的甲基化程度呈逐渐下降趋势(P＞0.05);相同日龄比较,添加叶酸下调SREBP-1c基因的表达水平,且高叶酸添加组比对照组SREBP-1c甲基化程度分别下降了8.54％、9.47％及8.37％,但甲基化程度均未达到显著性差异(P＞0.05).FAS与SREBP-1c基因表达水平呈现一致的变化趋势,1日龄时达到峰值,组间达到显著差异(P＜0.05),然而FAS基因在胚胎发育过程中各CpG位点均呈现高度去甲基化状态.与此不同的是,乙酰辅酶A羧化酶(ACC)与FAS基因表达水平随胚龄增加呈现相反的变化趋势,组间比较,16胚龄时差异显著(P＜0.05).由此可见,种鸡产蛋期叶酸水平在一定程度上提高种蛋中叶酸沉积(P＜0.05),且影响子代胚胎部分时期脂质代谢相关基因(SREBP-1c、FAS、ACC)表达.SREBP-1c、FAS启动子区域的甲基化程度与基因表达水平没有相关性;组间比较,叶酸添加组间甲基化变化也没有差异,可能的原因是叶酸水平对该基因甲基化程度的影响不起主导作用,是影响了其他基因的甲基化程度和表达水平,间接影响SREBP-1c的基因表达水平. 本試驗旨在研究飼糧葉痠水平對種鷄子代胚胎期肝髒脂代謝相關基因錶達及其甲基化的影響.試驗選用120日齡體重相近的北京油鷄90隻隨機分為3組(每組30箇重複,每箇重複1隻),單籠飼養,分彆飼餵在玉米-豆粕型基礎飼糧(葉痠含量0.53 mg/kg)中添加0(對照組)、2.5、5.0 mg/kg葉痠的試驗飼糧,常規籠養90 d.于產蛋高峰期收集種蛋孵化,子代分彆于16胚齡、19胚齡和1日齡時取肝髒組織.採用放射免疫的方法檢測種蛋及飼糧葉痠含量;實時熒光定量聚閤酶鏈式反應(RT-PCR)方法檢測子代胚胎期肝髒脂肪閤成關鍵基因mRNA的錶達水平;重亞硫痠鹽脩飾直接測序法(BSP)和半巢式聚閤酶鏈式反應檢測肝髒固醇類調節元件結閤蛋白(SREBP-1c)啟動子區域(-789～-466 bp)及脂肪痠閤成酶(FAS)啟動子區域(-159～+143 bp)的甲基化程度.結果錶明:飼糧添加2.5 mg/kg葉痠使得種蛋中葉痠沉積比對照組增加瞭81.92％ (P＜0.05).SREBP-1c基因錶達水平隨胚齡的增加呈上調的趨勢,而其覈心啟動子區域的甲基化程度呈逐漸下降趨勢(P＞0.05);相同日齡比較,添加葉痠下調SREBP-1c基因的錶達水平,且高葉痠添加組比對照組SREBP-1c甲基化程度分彆下降瞭8.54％、9.47％及8.37％,但甲基化程度均未達到顯著性差異(P＞0.05).FAS與SREBP-1c基因錶達水平呈現一緻的變化趨勢,1日齡時達到峰值,組間達到顯著差異(P＜0.05),然而FAS基因在胚胎髮育過程中各CpG位點均呈現高度去甲基化狀態.與此不同的是,乙酰輔酶A羧化酶(ACC)與FAS基因錶達水平隨胚齡增加呈現相反的變化趨勢,組間比較,16胚齡時差異顯著(P＜0.05).由此可見,種鷄產蛋期葉痠水平在一定程度上提高種蛋中葉痠沉積(P＜0.05),且影響子代胚胎部分時期脂質代謝相關基因(SREBP-1c、FAS、ACC)錶達.SREBP-1c、FAS啟動子區域的甲基化程度與基因錶達水平沒有相關性;組間比較,葉痠添加組間甲基化變化也沒有差異,可能的原因是葉痠水平對該基因甲基化程度的影響不起主導作用,是影響瞭其他基因的甲基化程度和錶達水平,間接影響SREBP-1c的基因錶達水平.
본시험지재연구사량협산수평대충계자대배태기간장지대사상관기인표체급기갑기화적영향.시험선용120일령체중상근적북경유계90지수궤분위3조(매조30개중복,매개중복1지),단롱사양,분별사위재옥미-두박형기출사량(협산함량0.53 mg/kg)중첨가0(대조조)、2.5、5.0 mg/kg협산적시험사량,상규롱양90 d.우산단고봉기수집충단부화,자대분별우16배령、19배령화1일령시취간장조직.채용방사면역적방법검측충단급사량협산함량;실시형광정량취합매련식반응(RT-PCR)방법검측자대배태기간장지방합성관건기인mRNA적표체수평;중아류산염수식직접측서법(BSP)화반소식취합매련식반응검측간장고순류조절원건결합단백(SREBP-1c)계동자구역(-789～-466 bp)급지방산합성매(FAS)계동자구역(-159～+143 bp)적갑기화정도.결과표명:사량첨가2.5 mg/kg협산사득충단중협산침적비대조조증가료81.92％ (P＜0.05).SREBP-1c기인표체수평수배령적증가정상조적추세,이기핵심계동자구역적갑기화정도정축점하강추세(P＞0.05);상동일령비교,첨가협산하조SREBP-1c기인적표체수평,차고협산첨가조비대조조SREBP-1c갑기화정도분별하강료8.54％、9.47％급8.37％,단갑기화정도균미체도현저성차이(P＞0.05).FAS여SREBP-1c기인표체수평정현일치적변화추세,1일령시체도봉치,조간체도현저차이(P＜0.05),연이FAS기인재배태발육과정중각CpG위점균정현고도거갑기화상태.여차불동적시,을선보매A최화매(ACC)여FAS기인표체수평수배령증가정현상반적변화추세,조간비교,16배령시차이현저(P＜0.05).유차가견,충계산단기협산수평재일정정도상제고충단중협산침적(P＜0.05),차영향자대배태부분시기지질대사상관기인(SREBP-1c、FAS、ACC)표체.SREBP-1c、FAS계동자구역적갑기화정도여기인표체수평몰유상관성;조간비교,협산첨가조간갑기화변화야몰유차이,가능적원인시협산수평대해기인갑기화정도적영향불기주도작용,시영향료기타기인적갑기화정도화표체수평,간접영향SREBP-1c적기인표체수평.