安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2014年
8期
1053-1056
,共4页
范文洁%贾振亚%曹静%徐玥%范璐璐%孙国平
範文潔%賈振亞%曹靜%徐玥%範璐璐%孫國平
범문길%가진아%조정%서모%범로로%손국평
肝癌%自噬%褪黑素%细胞增殖
肝癌%自噬%褪黑素%細胞增殖
간암%자서%퇴흑소%세포증식
liver neoplasms%autophagy%melatonin%cell proliferation
目的 研究褪黑素(MT)对人肝癌HepG2细胞自噬功能的影响,并初步探讨自噬在MT诱导细胞死亡中的作用.方法 体外培养肝癌细胞株HepG2,用不同浓度的MT(10-7、10-5、10-3 mol/L)作用于HepG2细胞,Western blot法检测HepG2细胞自噬相关蛋白LC3(LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ)的表达,并用单丹磺酰尸胺(MDC)染色在激光共聚焦显微镜下观察HepG2细胞内自噬体形成情况;在给予MT的同时使用3-甲基腺嘌呤(3-MA)或氯喹(CQ)对细胞自噬进行抑制,利用MTT和Western blot法分别测定HepG2细胞的细胞活力和LC3蛋白的表达变化.结果 MT作用后可诱导HepG2细胞内自噬小体形成,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ表达增多且呈剂量依赖关系.MT作用后,HepG2细胞生长受到抑制,加入3-MA或CQ抑制自噬后,细胞生长受抑现象更加显著.MT+ 3-MA组LC3-Ⅱ/β-actin比值较MT单药组明显减小,MT+CQ组则比值增大.结论 MT可激活肝癌细胞HepG2保护性自噬反应,通过3-MA或CQ阻断MT诱导的自噬通路可显著增强MT对HepG2细胞的生长抑制作用,提示自噬可能是肝癌细胞HepG2逃避MT肿瘤杀伤作用的一种有效机制.
目的 研究褪黑素(MT)對人肝癌HepG2細胞自噬功能的影響,併初步探討自噬在MT誘導細胞死亡中的作用.方法 體外培養肝癌細胞株HepG2,用不同濃度的MT(10-7、10-5、10-3 mol/L)作用于HepG2細胞,Western blot法檢測HepG2細胞自噬相關蛋白LC3(LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ)的錶達,併用單丹磺酰尸胺(MDC)染色在激光共聚焦顯微鏡下觀察HepG2細胞內自噬體形成情況;在給予MT的同時使用3-甲基腺嘌呤(3-MA)或氯喹(CQ)對細胞自噬進行抑製,利用MTT和Western blot法分彆測定HepG2細胞的細胞活力和LC3蛋白的錶達變化.結果 MT作用後可誘導HepG2細胞內自噬小體形成,自噬相關蛋白LC3-Ⅱ錶達增多且呈劑量依賴關繫.MT作用後,HepG2細胞生長受到抑製,加入3-MA或CQ抑製自噬後,細胞生長受抑現象更加顯著.MT+ 3-MA組LC3-Ⅱ/β-actin比值較MT單藥組明顯減小,MT+CQ組則比值增大.結論 MT可激活肝癌細胞HepG2保護性自噬反應,通過3-MA或CQ阻斷MT誘導的自噬通路可顯著增彊MT對HepG2細胞的生長抑製作用,提示自噬可能是肝癌細胞HepG2逃避MT腫瘤殺傷作用的一種有效機製.
목적 연구퇴흑소(MT)대인간암HepG2세포자서공능적영향,병초보탐토자서재MT유도세포사망중적작용.방법 체외배양간암세포주HepG2,용불동농도적MT(10-7、10-5、10-3 mol/L)작용우HepG2세포,Western blot법검측HepG2세포자서상관단백LC3(LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ)적표체,병용단단광선시알(MDC)염색재격광공취초현미경하관찰HepG2세포내자서체형성정황;재급여MT적동시사용3-갑기선표령(3-MA)혹록규(CQ)대세포자서진행억제,이용MTT화Western blot법분별측정HepG2세포적세포활력화LC3단백적표체변화.결과 MT작용후가유도HepG2세포내자서소체형성,자서상관단백LC3-Ⅱ표체증다차정제량의뢰관계.MT작용후,HepG2세포생장수도억제,가입3-MA혹CQ억제자서후,세포생장수억현상경가현저.MT+ 3-MA조LC3-Ⅱ/β-actin비치교MT단약조명현감소,MT+CQ조칙비치증대.결론 MT가격활간암세포HepG2보호성자서반응,통과3-MA혹CQ조단MT유도적자서통로가현저증강MT대HepG2세포적생장억제작용,제시자서가능시간암세포HepG2도피MT종류살상작용적일충유효궤제.
