中国循环杂志
中國循環雜誌
중국순배잡지
CHINESE CIRCULATION JOURNAL
2014年
8期
643-647
,共5页
史彤彤%程明月%张超群%张卓琦%王志荣
史彤彤%程明月%張超群%張卓琦%王誌榮
사동동%정명월%장초군%장탁기%왕지영
白藜三醇%磷酸化蛋白激酶B%磷酸化内皮型一氧化氮合酶%一氧化氮%血管生成
白藜三醇%燐痠化蛋白激酶B%燐痠化內皮型一氧化氮閤酶%一氧化氮%血管生成
백려삼순%린산화단백격매B%린산화내피형일양화담합매%일양화담%혈관생성
Resveratrol%p-Akt%p-eNOS%NO%Angiogenesis
目的：探究白藜三醇（Res）对正常状态下人脐静脉内皮细胞（HUVEC）血管生成的影响及其可能机制。<br> 方法：体外培养HUVEC，实验分为：DMEM高糖（<4500 mg/L）培养基培养组（正常组）、白藜三醇组（药物组）、白藜三醇+磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）阻断剂组（LY294002，药物阻断剂组1）、LY294002组（阻断剂组1）、白藜三醇+NG-硝基-L-精氨酸甲酯盐酸盐组（一氧化氮合酶阻断剂L-NAME，药物阻断剂组2）、L-NAME组（阻断剂组2），其中LY294002为磷脂酰肌醇3-激酶阻断剂。采用CCK-8法检测细胞增殖情况；免疫印迹（Western blot）法检测蛋白激酶B（Akt）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、磷酸化内皮型一氧化氮合酶（p-eNOS）蛋白的表达；亚硝酸还原酶法检测一氧化氮（NO）的水平；迁移小室（transwell chamber）检测内皮细胞的迁移能力；小管形成实验检测内皮细胞的体外小管形成能力。<br> 结果：①药物组（1、5μmol/L）与正常组相比细胞增殖增加（P<0.01）；药物组（5μmol/L）与药物组（0.2、10、20μmol/L）相比细胞增殖增加（P<0.01）；药物组（20μmol/L）对细胞增殖有抑制作用（P<0.01），差异均有统计学意义。②药物组（5μmol/L ）较正常组p-Akt、p-eNOS蛋白表达增加（P<0.05~0.01），NO水平增加（P<0.05），差异均有统计学意义；药物阻断剂组1 p-Akt、p-eNOS蛋白表达与药物组比较均减低（P均<0.01），NO水平减低（P<0.05）；药物阻断剂组1（5μmol/L）较阻断剂组1 p-Akt蛋白、p-eNOS蛋白及NO差异均无统计学意义（P均>0.05）。③细胞迁移及小管形成实验：药物组（5μmol/L）内皮细胞迁移率及体外小管形成数量大于正常组（P<0.01），药物阻断剂组2内皮细胞迁移率及体外小管形成数量小于药物组（P<0.01）。<br> 结论：白藜三醇可能通过激活PI3K/Akt/eNOS信号通路诱导正常状态下内皮细胞NO水平的增加，从而促进内皮细胞增殖、迁移及体外小管形成。
目的：探究白藜三醇（Res）對正常狀態下人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）血管生成的影響及其可能機製。<br> 方法：體外培養HUVEC，實驗分為：DMEM高糖（<4500 mg/L）培養基培養組（正常組）、白藜三醇組（藥物組）、白藜三醇+燐脂酰肌醇3-激酶（PI3K）阻斷劑組（LY294002，藥物阻斷劑組1）、LY294002組（阻斷劑組1）、白藜三醇+NG-硝基-L-精氨痠甲酯鹽痠鹽組（一氧化氮閤酶阻斷劑L-NAME，藥物阻斷劑組2）、L-NAME組（阻斷劑組2），其中LY294002為燐脂酰肌醇3-激酶阻斷劑。採用CCK-8法檢測細胞增殖情況；免疫印跡（Western blot）法檢測蛋白激酶B（Akt）、燐痠化蛋白激酶B（p-Akt）、內皮型一氧化氮閤酶（eNOS）、燐痠化內皮型一氧化氮閤酶（p-eNOS）蛋白的錶達；亞硝痠還原酶法檢測一氧化氮（NO）的水平；遷移小室（transwell chamber）檢測內皮細胞的遷移能力；小管形成實驗檢測內皮細胞的體外小管形成能力。<br> 結果：①藥物組（1、5μmol/L）與正常組相比細胞增殖增加（P<0.01）；藥物組（5μmol/L）與藥物組（0.2、10、20μmol/L）相比細胞增殖增加（P<0.01）；藥物組（20μmol/L）對細胞增殖有抑製作用（P<0.01），差異均有統計學意義。②藥物組（5μmol/L ）較正常組p-Akt、p-eNOS蛋白錶達增加（P<0.05~0.01），NO水平增加（P<0.05），差異均有統計學意義；藥物阻斷劑組1 p-Akt、p-eNOS蛋白錶達與藥物組比較均減低（P均<0.01），NO水平減低（P<0.05）；藥物阻斷劑組1（5μmol/L）較阻斷劑組1 p-Akt蛋白、p-eNOS蛋白及NO差異均無統計學意義（P均>0.05）。③細胞遷移及小管形成實驗：藥物組（5μmol/L）內皮細胞遷移率及體外小管形成數量大于正常組（P<0.01），藥物阻斷劑組2內皮細胞遷移率及體外小管形成數量小于藥物組（P<0.01）。<br> 結論：白藜三醇可能通過激活PI3K/Akt/eNOS信號通路誘導正常狀態下內皮細胞NO水平的增加，從而促進內皮細胞增殖、遷移及體外小管形成。
목적：탐구백려삼순（Res）대정상상태하인제정맥내피세포（HUVEC）혈관생성적영향급기가능궤제。<br> 방법：체외배양HUVEC，실험분위：DMEM고당（<4500 mg/L）배양기배양조（정상조）、백려삼순조（약물조）、백려삼순+린지선기순3-격매（PI3K）조단제조（LY294002，약물조단제조1）、LY294002조（조단제조1）、백려삼순+NG-초기-L-정안산갑지염산염조（일양화담합매조단제L-NAME，약물조단제조2）、L-NAME조（조단제조2），기중LY294002위린지선기순3-격매조단제。채용CCK-8법검측세포증식정황；면역인적（Western blot）법검측단백격매B（Akt）、린산화단백격매B（p-Akt）、내피형일양화담합매（eNOS）、린산화내피형일양화담합매（p-eNOS）단백적표체；아초산환원매법검측일양화담（NO）적수평；천이소실（transwell chamber）검측내피세포적천이능력；소관형성실험검측내피세포적체외소관형성능력。<br> 결과：①약물조（1、5μmol/L）여정상조상비세포증식증가（P<0.01）；약물조（5μmol/L）여약물조（0.2、10、20μmol/L）상비세포증식증가（P<0.01）；약물조（20μmol/L）대세포증식유억제작용（P<0.01），차이균유통계학의의。②약물조（5μmol/L ）교정상조p-Akt、p-eNOS단백표체증가（P<0.05~0.01），NO수평증가（P<0.05），차이균유통계학의의；약물조단제조1 p-Akt、p-eNOS단백표체여약물조비교균감저（P균<0.01），NO수평감저（P<0.05）；약물조단제조1（5μmol/L）교조단제조1 p-Akt단백、p-eNOS단백급NO차이균무통계학의의（P균>0.05）。③세포천이급소관형성실험：약물조（5μmol/L）내피세포천이솔급체외소관형성수량대우정상조（P<0.01），약물조단제조2내피세포천이솔급체외소관형성수량소우약물조（P<0.01）。<br> 결론：백려삼순가능통과격활PI3K/Akt/eNOS신호통로유도정상상태하내피세포NO수평적증가，종이촉진내피세포증식、천이급체외소관형성。
Objective: To explore the effect of resveratrol (Res) on angiogenesis of human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) with the possible mechanisms in vitro. <br> Methods: The HUVECs were cultured in 6 groups.①Control group, HUVEC were cultured with high glucose in DMEM,②Res group, the cell were cultured with Res at different concentrations,③Res with PI3K blocker LY294002 (Res+Blocker 1) group, ④Blocker 1 group, HUVEC were cultured with LY294002 alone, ⑤Res with eNOS blocker L-NAME (Res +Blocker 2) group and ⑥Blocker 2 group. The effect of Res on HUVEC proliferation was detected by CCK-8 kit, the protein expressions of p-Akt, p-eNOS were examined by Westin blot analysis, nitric oxide (NO) level was measured by nitrate reduction method and the endothelial cell migration was assayed by transwell chamber method. <br> Results: ① Compared with Control group, HUVEC proliferation increased in Res (1, 5μmol/L ) group, P<0.01, the proliferation in Res (5μmol/L) group was higher than those in Res (0.2, 10, 20μmol/L) group, P<0.01, while Res (20 μmol/L) group could inhibit the proliferation P<0.01. ②Compared with Control group, Res (5μmol/L) group had the higher protein expressions of p-Akt, p-eNOS, P<0.05-0.01, higher NO level, P<0.05.③Compared with Res group, Res+Blocker 1 group had lower expressions of p-Akt, p-eNOS, P<0.01, lower NO, P<0.05; the expressions of p-Akt, p-eNOS and NO level were similar between Res+Blocker 1 group and Blocker 1 group, all P>0.05.④Compared with Control group, the cell migration and tubing formation were higher in Res (5μmol/L) group, P<0.01;compared with Res group, the cell migration and tubing formation were lower in Res+Block2 group, P<0.01. <br> Conclusion: Res could up-regulate NO level via activating PI3-K/Akt/eNOS signaling and therefore, improving the proliferation, migration and tubing formation of HUVEC in vitro.
