肾脏病与透析肾移植杂志
腎髒病與透析腎移植雜誌
신장병여투석신이식잡지
CHINESE JOURNAL OF NEPHROLOGY,DIALYSIS & TRANSPLANTATION
2014年
4期
342-348
,共7页
何静%夏虹%张昌明%刘志红%施少林
何靜%夏虹%張昌明%劉誌紅%施少林
하정%하홍%장창명%류지홍%시소림
线粒体DNA%实时定量PCR%肾脏疾病%生物标志物%微囊泡
線粒體DNA%實時定量PCR%腎髒疾病%生物標誌物%微囊泡
선립체DNA%실시정량PCR%신장질병%생물표지물%미낭포
mitochondrial DNA%real-time PCR%kidney diseases%biomarker microvesicles
目的:建立基于实时定量PCR的线粒体DNA(mtDNA)拷贝数的检测方法,并利用所建立的方法初步检测和探讨mtDNA在肾脏疾病诊断中的应用. 方法:设计mtDNA PCR扩增引物,PCR扩增获得mtDNA片段,与T载体质粒连接,构建mtDNA定量标准品.采用SYBR Green-Ⅰ染料法实时定量PCR方法建立mtDNA定量的标准曲线,检验定量方法的重复性与特异性.利用所建立的方法检测局灶节段性肾小球硬化(FSGS)患者血清mtDNA和尿液微囊泡(MV) mtDNA的变化;此外,还对体外嘌呤霉素氨基核苷(PAN)刺激的足细胞所分泌的MV中mtDNA进行了检测. 结果:(1)选取mtDNA特异性引物,通过SYBRGreen-Ⅰ实时定量PCR建立mtDNA拷贝数绝对定量的检测方法具有良好的特异度、灵敏度和重复性;(2)检测10例FSGS患者和6例正常对照血清mtDNA水平发现,FSGS患者血清mtDNA水平明显低于正常对照(P＜0.05);(3)检测5例FSGS患者与5例健康对照一定体积尿液中MV mtDNA含量发现,FSGS患者高于健康对照,但FSGS患者尿液MV的含量也显著高于健康对照;(4)受PAN刺激的足细胞,其分泌的MV中mtDNA含量下降,与足细胞内mtDNA含量变化相一致. 结论:本方法为探索mtDNA作为肾脏疾病诊断的生物标志物的可能性提供了有效的实验手段.
目的:建立基于實時定量PCR的線粒體DNA(mtDNA)拷貝數的檢測方法,併利用所建立的方法初步檢測和探討mtDNA在腎髒疾病診斷中的應用. 方法:設計mtDNA PCR擴增引物,PCR擴增穫得mtDNA片段,與T載體質粒連接,構建mtDNA定量標準品.採用SYBR Green-Ⅰ染料法實時定量PCR方法建立mtDNA定量的標準麯線,檢驗定量方法的重複性與特異性.利用所建立的方法檢測跼竈節段性腎小毬硬化(FSGS)患者血清mtDNA和尿液微囊泡(MV) mtDNA的變化;此外,還對體外嘌呤黴素氨基覈苷(PAN)刺激的足細胞所分泌的MV中mtDNA進行瞭檢測. 結果:(1)選取mtDNA特異性引物,通過SYBRGreen-Ⅰ實時定量PCR建立mtDNA拷貝數絕對定量的檢測方法具有良好的特異度、靈敏度和重複性;(2)檢測10例FSGS患者和6例正常對照血清mtDNA水平髮現,FSGS患者血清mtDNA水平明顯低于正常對照(P＜0.05);(3)檢測5例FSGS患者與5例健康對照一定體積尿液中MV mtDNA含量髮現,FSGS患者高于健康對照,但FSGS患者尿液MV的含量也顯著高于健康對照;(4)受PAN刺激的足細胞,其分泌的MV中mtDNA含量下降,與足細胞內mtDNA含量變化相一緻. 結論:本方法為探索mtDNA作為腎髒疾病診斷的生物標誌物的可能性提供瞭有效的實驗手段.
목적:건립기우실시정량PCR적선립체DNA(mtDNA)고패수적검측방법,병이용소건립적방법초보검측화탐토mtDNA재신장질병진단중적응용. 방법:설계mtDNA PCR확증인물,PCR확증획득mtDNA편단,여T재체질립련접,구건mtDNA정량표준품.채용SYBR Green-Ⅰ염료법실시정량PCR방법건립mtDNA정량적표준곡선,검험정량방법적중복성여특이성.이용소건립적방법검측국조절단성신소구경화(FSGS)환자혈청mtDNA화뇨액미낭포(MV) mtDNA적변화;차외,환대체외표령매소안기핵감(PAN)자격적족세포소분비적MV중mtDNA진행료검측. 결과:(1)선취mtDNA특이성인물,통과SYBRGreen-Ⅰ실시정량PCR건립mtDNA고패수절대정량적검측방법구유량호적특이도、령민도화중복성;(2)검측10례FSGS환자화6례정상대조혈청mtDNA수평발현,FSGS환자혈청mtDNA수평명현저우정상대조(P＜0.05);(3)검측5례FSGS환자여5례건강대조일정체적뇨액중MV mtDNA함량발현,FSGS환자고우건강대조,단FSGS환자뇨액MV적함량야현저고우건강대조;(4)수PAN자격적족세포,기분비적MV중mtDNA함량하강,여족세포내mtDNA함량변화상일치. 결론:본방법위탐색mtDNA작위신장질병진단적생물표지물적가능성제공료유효적실험수단.
