山西医科大学学报
山西醫科大學學報
산서의과대학학보
JOURNAL OF SHANXI MEDICAL UNIVERSITY
2014年
8期
678-682,783
,共6页
吴彬%游锦梅%李钰%Yang Yong%陈显久
吳彬%遊錦梅%李鈺%Yang Yong%陳顯久
오빈%유금매%리옥%Yang Yong%진현구
磷酸核糖焦磷酸合成酶2/PRPS2%RNA干扰%HCT116细胞%基因重组
燐痠覈糖焦燐痠閤成酶2/PRPS2%RNA榦擾%HCT116細胞%基因重組
린산핵당초린산합성매2/PRPS2%RNA간우%HCT116세포%기인중조
phosphoribosyl pyrophosphate synthetase 2(PRPS2)%RNA interfere%HCT116 cells%gene recombination
目的 构建磷酸核糖焦磷酸合成酶2(phosphoribosyl pyrophosphate synthetase 2,PRPS2)基因shRNA质粒,为探讨PRPS2基因功能奠定基础. 方法 设计并合成PRPS2基因shRNA,将其分别与真核表达载体GV102重组为shRNA质粒,分别命名为GV102-PRPS2-1、GV102-PRPS2-2、GV102-PRPS2-3,分别转染这三种载体的细胞设为实验组1、2、3;阴性对照载体命名为GV102-PRPS2-0,转染该载体设为阴性对照组;分别测序鉴定.常规转染人结肠癌HCT116细胞后采用RT-PCR、Western blot检测细胞PRPS2基因的表达水平,筛选干扰效果最佳shRNA载体. 结果 设计并合成的PRPS2干扰载体,经测序鉴定序列正确.转染HCT116细胞后在72 h内发绿色荧光的细胞数量随时间的增加而增强,转染效率均介于40％-50％.RT-PCR和Western blot结果显示,转染shRNA质粒的3个实验组PRPS2表达均较阴性对照组显著下降(P＜0.05),其中GV102-PRPS2-3使细胞中PRPS2的mRNA(0.27 ±0.05)水平下降73％、蛋白(0.30 ±0.04)水平下降70％,干扰效果优于GV102-PRPS2-1(mRNA:0.61±0.03,蛋白:0.37±0.06)和GV102-PRPS2-2(mRNA:0.89±0.02,蛋白:0.84±0.05). 结论 本研究利用RNAi技术下调了人结肠癌HCT116细胞中PRPS2基因的表达,为深入探讨PRPS2表达下调后对细胞行为的影响奠定了研究基础.
目的 構建燐痠覈糖焦燐痠閤成酶2(phosphoribosyl pyrophosphate synthetase 2,PRPS2)基因shRNA質粒,為探討PRPS2基因功能奠定基礎. 方法 設計併閤成PRPS2基因shRNA,將其分彆與真覈錶達載體GV102重組為shRNA質粒,分彆命名為GV102-PRPS2-1、GV102-PRPS2-2、GV102-PRPS2-3,分彆轉染這三種載體的細胞設為實驗組1、2、3;陰性對照載體命名為GV102-PRPS2-0,轉染該載體設為陰性對照組;分彆測序鑒定.常規轉染人結腸癌HCT116細胞後採用RT-PCR、Western blot檢測細胞PRPS2基因的錶達水平,篩選榦擾效果最佳shRNA載體. 結果 設計併閤成的PRPS2榦擾載體,經測序鑒定序列正確.轉染HCT116細胞後在72 h內髮綠色熒光的細胞數量隨時間的增加而增彊,轉染效率均介于40％-50％.RT-PCR和Western blot結果顯示,轉染shRNA質粒的3箇實驗組PRPS2錶達均較陰性對照組顯著下降(P＜0.05),其中GV102-PRPS2-3使細胞中PRPS2的mRNA(0.27 ±0.05)水平下降73％、蛋白(0.30 ±0.04)水平下降70％,榦擾效果優于GV102-PRPS2-1(mRNA:0.61±0.03,蛋白:0.37±0.06)和GV102-PRPS2-2(mRNA:0.89±0.02,蛋白:0.84±0.05). 結論 本研究利用RNAi技術下調瞭人結腸癌HCT116細胞中PRPS2基因的錶達,為深入探討PRPS2錶達下調後對細胞行為的影響奠定瞭研究基礎.
목적 구건린산핵당초린산합성매2(phosphoribosyl pyrophosphate synthetase 2,PRPS2)기인shRNA질립,위탐토PRPS2기인공능전정기출. 방법 설계병합성PRPS2기인shRNA,장기분별여진핵표체재체GV102중조위shRNA질립,분별명명위GV102-PRPS2-1、GV102-PRPS2-2、GV102-PRPS2-3,분별전염저삼충재체적세포설위실험조1、2、3;음성대조재체명명위GV102-PRPS2-0,전염해재체설위음성대조조;분별측서감정.상규전염인결장암HCT116세포후채용RT-PCR、Western blot검측세포PRPS2기인적표체수평,사선간우효과최가shRNA재체. 결과 설계병합성적PRPS2간우재체,경측서감정서렬정학.전염HCT116세포후재72 h내발록색형광적세포수량수시간적증가이증강,전염효솔균개우40％-50％.RT-PCR화Western blot결과현시,전염shRNA질립적3개실험조PRPS2표체균교음성대조조현저하강(P＜0.05),기중GV102-PRPS2-3사세포중PRPS2적mRNA(0.27 ±0.05)수평하강73％、단백(0.30 ±0.04)수평하강70％,간우효과우우GV102-PRPS2-1(mRNA:0.61±0.03,단백:0.37±0.06)화GV102-PRPS2-2(mRNA:0.89±0.02,단백:0.84±0.05). 결론 본연구이용RNAi기술하조료인결장암HCT116세포중PRPS2기인적표체,위심입탐토PRPS2표체하조후대세포행위적영향전정료연구기출.
