遵义医学院学报
遵義醫學院學報
준의의학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE ZUNYI
2014年
4期
384-386,392
,共4页
吕延成%潘晓瑜%黄畅%丁娟
呂延成%潘曉瑜%黃暢%丁娟
려연성%반효유%황창%정연
RNA联合干扰%Ⅱ型单纯疱疹病毒%UL54基因%UL29基因%短发夹RNA
RNA聯閤榦擾%Ⅱ型單純皰疹病毒%UL54基因%UL29基因%短髮夾RNA
RNA연합간우%Ⅱ형단순포진병독%UL54기인%UL29기인%단발협RNA
目的 利用RNAi技术同时沉默Ⅱ型单纯疱疹病毒的UL54和UL29基因,探讨双基因干扰对HSV-2复制的影响.方法 采用pGPU6/GFP/Neo质粒分别构建UL54、UL29基因的shRNA重组表达质粒,单独或同时转染HEK293细胞,通过实时荧光定量PCR和蛋白质印迹方法检测UL54、UL29基因的表达,终点滴定法检测培养细胞上清液中病毒感染滴度;MTT法测定细胞的存活效率.结果 转染后48h后,与空白组相比,各干扰组均可不同程度降低上清液中的病毒滴度,提高细胞存活率,降低目的基因mRNA和蛋白的表达(P＜0.01).与单干扰组相比,双基因干扰组能更有效降低病毒滴度并提高细胞存活率(P＜0.01),增加了对UL54和UL29基因mRNA的抑制率,降低了蛋白的表达(P＜0.01).结论 pG-PU6/GFP/Neo-UL54、pGPU6/GFP/Neo-UL29重组表达质粒同时转染细胞可抑制HSV-2的复制,采用双基因干扰比单独基因干扰具有更高的效率.
目的 利用RNAi技術同時沉默Ⅱ型單純皰疹病毒的UL54和UL29基因,探討雙基因榦擾對HSV-2複製的影響.方法 採用pGPU6/GFP/Neo質粒分彆構建UL54、UL29基因的shRNA重組錶達質粒,單獨或同時轉染HEK293細胞,通過實時熒光定量PCR和蛋白質印跡方法檢測UL54、UL29基因的錶達,終點滴定法檢測培養細胞上清液中病毒感染滴度;MTT法測定細胞的存活效率.結果 轉染後48h後,與空白組相比,各榦擾組均可不同程度降低上清液中的病毒滴度,提高細胞存活率,降低目的基因mRNA和蛋白的錶達(P＜0.01).與單榦擾組相比,雙基因榦擾組能更有效降低病毒滴度併提高細胞存活率(P＜0.01),增加瞭對UL54和UL29基因mRNA的抑製率,降低瞭蛋白的錶達(P＜0.01).結論 pG-PU6/GFP/Neo-UL54、pGPU6/GFP/Neo-UL29重組錶達質粒同時轉染細胞可抑製HSV-2的複製,採用雙基因榦擾比單獨基因榦擾具有更高的效率.
목적 이용RNAi기술동시침묵Ⅱ형단순포진병독적UL54화UL29기인,탐토쌍기인간우대HSV-2복제적영향.방법 채용pGPU6/GFP/Neo질립분별구건UL54、UL29기인적shRNA중조표체질립,단독혹동시전염HEK293세포,통과실시형광정량PCR화단백질인적방법검측UL54、UL29기인적표체,종점적정법검측배양세포상청액중병독감염적도;MTT법측정세포적존활효솔.결과 전염후48h후,여공백조상비,각간우조균가불동정도강저상청액중적병독적도,제고세포존활솔,강저목적기인mRNA화단백적표체(P＜0.01).여단간우조상비,쌍기인간우조능경유효강저병독적도병제고세포존활솔(P＜0.01),증가료대UL54화UL29기인mRNA적억제솔,강저료단백적표체(P＜0.01).결론 pG-PU6/GFP/Neo-UL54、pGPU6/GFP/Neo-UL29중조표체질립동시전염세포가억제HSV-2적복제,채용쌍기인간우비단독기인간우구유경고적효솔.
