中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2014年
8期
646-650
,共5页
季新成%史茜%郭春娟%王科珂%冉多良
季新成%史茜%郭春娟%王科珂%冉多良
계신성%사천%곽춘연%왕과가%염다량
牛病毒性腹泻病毒%内标%共扩增%TaqMan荧光RT-PCR
牛病毒性腹瀉病毒%內標%共擴增%TaqMan熒光RT-PCR
우병독성복사병독%내표%공확증%TaqMan형광RT-PCR
bovine viral diarrhea virus%internal control%co-amplification%TaqMan real-time RT-PCR
为建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)内标双重TaqMan荧光RT-PCR方法,本研究根据BVDV 5'-UTR区序列设计引物和荧光标记探针,通过重叠延伸PCR (SOE-PCR)扩增获得内标模板,经体外转录得到可以作为内标物的cRNA.经反应条件的优化,建立了BVDV内标双重TaqMan荧光RT-PCR检测体系.结果表明:当cRNA浓度为103拷贝/μL时,二者均有较好的扩增曲线;该方法对Ⅰ型BVDV的检测灵敏度为0.25 TCID50,对Ⅱ型BVDV的检测灵敏度为2.5 TCID50;利用该方法对猪瘟病毒等其他相关核酸的检测结果均为阴性;重复性检测Ct值变异系数为0.54～4.73.对506份临床样品检测,结果有23份样品为阳性,阳性样品检出数量和编号与不含内标的单一荧光RT-PCR方法完全一致,表明该方法可以用来对BVDV进行准确、快速检测,并且可以对检测结果进行质量监控.
為建立牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)內標雙重TaqMan熒光RT-PCR方法,本研究根據BVDV 5'-UTR區序列設計引物和熒光標記探針,通過重疊延伸PCR (SOE-PCR)擴增穫得內標模闆,經體外轉錄得到可以作為內標物的cRNA.經反應條件的優化,建立瞭BVDV內標雙重TaqMan熒光RT-PCR檢測體繫.結果錶明:噹cRNA濃度為103拷貝/μL時,二者均有較好的擴增麯線;該方法對Ⅰ型BVDV的檢測靈敏度為0.25 TCID50,對Ⅱ型BVDV的檢測靈敏度為2.5 TCID50;利用該方法對豬瘟病毒等其他相關覈痠的檢測結果均為陰性;重複性檢測Ct值變異繫數為0.54～4.73.對506份臨床樣品檢測,結果有23份樣品為暘性,暘性樣品檢齣數量和編號與不含內標的單一熒光RT-PCR方法完全一緻,錶明該方法可以用來對BVDV進行準確、快速檢測,併且可以對檢測結果進行質量鑑控.
위건립우병독성복사병독(BVDV)내표쌍중TaqMan형광RT-PCR방법,본연구근거BVDV 5'-UTR구서렬설계인물화형광표기탐침,통과중첩연신PCR (SOE-PCR)확증획득내표모판,경체외전록득도가이작위내표물적cRNA.경반응조건적우화,건립료BVDV내표쌍중TaqMan형광RT-PCR검측체계.결과표명:당cRNA농도위103고패/μL시,이자균유교호적확증곡선;해방법대Ⅰ형BVDV적검측령민도위0.25 TCID50,대Ⅱ형BVDV적검측령민도위2.5 TCID50;이용해방법대저온병독등기타상관핵산적검측결과균위음성;중복성검측Ct치변이계수위0.54～4.73.대506빈림상양품검측,결과유23빈양품위양성,양성양품검출수량화편호여불함내표적단일형광RT-PCR방법완전일치,표명해방법가이용래대BVDV진행준학、쾌속검측,병차가이대검측결과진행질량감공.
