中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2014年
8期
620-623
,共4页
蔡伟刚%那雷%刘荻荻%马建%尹鑫%张泽力%艾有为%王晓钧
蔡偉剛%那雷%劉荻荻%馬建%尹鑫%張澤力%艾有為%王曉鈞
채위강%나뢰%류적적%마건%윤흠%장택력%애유위%왕효균
马TRIM5α%马传染性贫血病毒%抗病毒作用%衣壳蛋白%降解作用
馬TRIM5α%馬傳染性貧血病毒%抗病毒作用%衣殼蛋白%降解作用
마TRIM5α%마전염성빈혈병독%항병독작용%의각단백%강해작용
eqTRIM5α%EIAV%antivirus activity%capsid protein%degradation
TRIM5α是一种重要的天然免疫因子,能够限制多种逆转录病毒的跨种感染.为研究马的TRIM5α是否具有抗病毒作用,本实验采用RT-PCR技术从马外周血液细胞的总RNA中扩增TRIM5α基因.测序结果表明,与GenBank中唯一的马TRIM5α(eqTRIM5α)基因序列相比马基因组预测的TRIM5α (eqTRIM5α-predicted)基因在其C末端部位有208 bp片段的插入,该插入造成TRIM5α的截短突变(eqTRIM5α-S).通过删除插入片段后得到与eqTRIM5α-predicted基因相同的全长马的TRIM5α (eqTRIM5α-F)基因.同时将eqTRIM5α-S基因和eqTRIM5α-F基因分别插入pLPCX-HA真核表达载体中构建重组质粒,并分别转染293T细胞,转染24 h后感染马传染性贫血(EIAV)假病毒.通过检测荧光素酶活性,实验结果表明相对于阴性对照组eqTRIM5α-S可以有效地降低EIAV假病毒的复制,而eqTRIM5α-F则无该生物学功能.但通过将两种eqTRIM5α重组质粒与EIAV-gag表达重组质粒共转染293T细胞,结果表明eqTRIM5α-S和eqTRIM5α-F均不能降解Gag蛋白,这表明eqTRIM5α-S可能存在另一种机制限制EIAV的复制.
TRIM5α是一種重要的天然免疫因子,能夠限製多種逆轉錄病毒的跨種感染.為研究馬的TRIM5α是否具有抗病毒作用,本實驗採用RT-PCR技術從馬外週血液細胞的總RNA中擴增TRIM5α基因.測序結果錶明,與GenBank中唯一的馬TRIM5α(eqTRIM5α)基因序列相比馬基因組預測的TRIM5α (eqTRIM5α-predicted)基因在其C末耑部位有208 bp片段的插入,該插入造成TRIM5α的截短突變(eqTRIM5α-S).通過刪除插入片段後得到與eqTRIM5α-predicted基因相同的全長馬的TRIM5α (eqTRIM5α-F)基因.同時將eqTRIM5α-S基因和eqTRIM5α-F基因分彆插入pLPCX-HA真覈錶達載體中構建重組質粒,併分彆轉染293T細胞,轉染24 h後感染馬傳染性貧血(EIAV)假病毒.通過檢測熒光素酶活性,實驗結果錶明相對于陰性對照組eqTRIM5α-S可以有效地降低EIAV假病毒的複製,而eqTRIM5α-F則無該生物學功能.但通過將兩種eqTRIM5α重組質粒與EIAV-gag錶達重組質粒共轉染293T細胞,結果錶明eqTRIM5α-S和eqTRIM5α-F均不能降解Gag蛋白,這錶明eqTRIM5α-S可能存在另一種機製限製EIAV的複製.
TRIM5α시일충중요적천연면역인자,능구한제다충역전록병독적과충감염.위연구마적TRIM5α시부구유항병독작용,본실험채용RT-PCR기술종마외주혈액세포적총RNA중확증TRIM5α기인.측서결과표명,여GenBank중유일적마TRIM5α(eqTRIM5α)기인서렬상비마기인조예측적TRIM5α (eqTRIM5α-predicted)기인재기C말단부위유208 bp편단적삽입,해삽입조성TRIM5α적절단돌변(eqTRIM5α-S).통과산제삽입편단후득도여eqTRIM5α-predicted기인상동적전장마적TRIM5α (eqTRIM5α-F)기인.동시장eqTRIM5α-S기인화eqTRIM5α-F기인분별삽입pLPCX-HA진핵표체재체중구건중조질립,병분별전염293T세포,전염24 h후감염마전염성빈혈(EIAV)가병독.통과검측형광소매활성,실험결과표명상대우음성대조조eqTRIM5α-S가이유효지강저EIAV가병독적복제,이eqTRIM5α-F칙무해생물학공능.단통과장량충eqTRIM5α중조질립여EIAV-gag표체중조질립공전염293T세포,결과표명eqTRIM5α-S화eqTRIM5α-F균불능강해Gag단백,저표명eqTRIM5α-S가능존재령일충궤제한제EIAV적복제.
