烟草科技
煙草科技
연초과기
TOBACCO SCIENCE & TECHNOLOGY
2014年
8期
68-74,86
,共8页
赵丹%秦利军%孙洪荣%赵杰宏%赵德刚
趙丹%秦利軍%孫洪榮%趙傑宏%趙德剛
조단%진리군%손홍영%조걸굉%조덕강
烟草%CYP82E4v1%降烟碱%RNAi%超量表达
煙草%CYP82E4v1%降煙堿%RNAi%超量錶達
연초%CYP82E4v1%강연감%RNAi%초량표체
Nicotiana tabacum L.%CYP82E4v1%Nornicotine%RNA interference%Overexpression
为明确烟草烟碱去甲基酶基因CYP82E4v1在降烟碱生物合成中的调控作用,通过农杆菌介导,将含CYP82E4v1超量表达的植物表达载体pLF-35S-CYP和干涉表达的植物表达载体pLF-35S-CYPi分别遗传转化烟草品种K326,共获得转基因植株61株,其中超量表达植株42株,干涉表达植株19株.HPLC测定表明,超量表达植株降烟碱含量比对照烟草品种K326高88.9％,而干涉表达植株降烟碱含量比对照烟草低61.1％,表明CYP82E4v1的超量表达能提高烟草降烟碱含量,该基因的表达受到抑制时降烟碱合成受阻.Real-Time PCR分析结果表明,超量表达植株中CYP82E4v1基因的表达为对照烟草的20倍以上,在干涉表达植株中其表达量仅为对照烟草的6％.同时,在干涉表达植株中其他降烟碱合成基因,如CYP82E5v2和CYP82E10等也受到不同程度的抑制.此外,在构建植物表达载体时,引入衰老基因SAG12启动子驱动重组酶基因FLP的“Gene-deletor”表达元件,在烟草叶片发育后期以清除转基因植株中外源GUS::NPTⅡ基因,从而获得了降烟碱含量低且不合筛选标记基因的转基因烟草植株.
為明確煙草煙堿去甲基酶基因CYP82E4v1在降煙堿生物閤成中的調控作用,通過農桿菌介導,將含CYP82E4v1超量錶達的植物錶達載體pLF-35S-CYP和榦涉錶達的植物錶達載體pLF-35S-CYPi分彆遺傳轉化煙草品種K326,共穫得轉基因植株61株,其中超量錶達植株42株,榦涉錶達植株19株.HPLC測定錶明,超量錶達植株降煙堿含量比對照煙草品種K326高88.9％,而榦涉錶達植株降煙堿含量比對照煙草低61.1％,錶明CYP82E4v1的超量錶達能提高煙草降煙堿含量,該基因的錶達受到抑製時降煙堿閤成受阻.Real-Time PCR分析結果錶明,超量錶達植株中CYP82E4v1基因的錶達為對照煙草的20倍以上,在榦涉錶達植株中其錶達量僅為對照煙草的6％.同時,在榦涉錶達植株中其他降煙堿閤成基因,如CYP82E5v2和CYP82E10等也受到不同程度的抑製.此外,在構建植物錶達載體時,引入衰老基因SAG12啟動子驅動重組酶基因FLP的“Gene-deletor”錶達元件,在煙草葉片髮育後期以清除轉基因植株中外源GUS::NPTⅡ基因,從而穫得瞭降煙堿含量低且不閤篩選標記基因的轉基因煙草植株.
위명학연초연감거갑기매기인CYP82E4v1재강연감생물합성중적조공작용,통과농간균개도,장함CYP82E4v1초량표체적식물표체재체pLF-35S-CYP화간섭표체적식물표체재체pLF-35S-CYPi분별유전전화연초품충K326,공획득전기인식주61주,기중초량표체식주42주,간섭표체식주19주.HPLC측정표명,초량표체식주강연감함량비대조연초품충K326고88.9％,이간섭표체식주강연감함량비대조연초저61.1％,표명CYP82E4v1적초량표체능제고연초강연감함량,해기인적표체수도억제시강연감합성수조.Real-Time PCR분석결과표명,초량표체식주중CYP82E4v1기인적표체위대조연초적20배이상,재간섭표체식주중기표체량부위대조연초적6％.동시,재간섭표체식주중기타강연감합성기인,여CYP82E5v2화CYP82E10등야수도불동정도적억제.차외,재구건식물표체재체시,인입쇠로기인SAG12계동자구동중조매기인FLP적“Gene-deletor”표체원건,재연초협편발육후기이청제전기인식주중외원GUS::NPTⅡ기인,종이획득료강연감함량저차불합사선표기기인적전기인연초식주.
