中国组织工程研究
中國組織工程研究
중국조직공정연구
Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research
2014年
24期
3821-3828
,共8页
余灏涛%徐义春%王其友%欧定强%周葳
餘灝濤%徐義春%王其友%歐定彊%週葳
여호도%서의춘%왕기우%구정강%주위
组织构建%骨组织工程%组织工程基础实验%骨形态发生蛋白7%PI3K/Akt通路%人髓核细胞%凋亡%无血清%p-Akt%BAD蛋白%Caspase9%流式细胞术%蛋白印迹法
組織構建%骨組織工程%組織工程基礎實驗%骨形態髮生蛋白7%PI3K/Akt通路%人髓覈細胞%凋亡%無血清%p-Akt%BAD蛋白%Caspase9%流式細胞術%蛋白印跡法
조직구건%골조직공정%조직공정기출실험%골형태발생단백7%PI3K/Akt통로%인수핵세포%조망%무혈청%p-Akt%BAD단백%Caspase9%류식세포술%단백인적법
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背景:骨形态发生蛋白7可促进人髓核细胞的细胞外基质合成,减缓椎间盘退变.近年来,有学者提出其可能通过对抗髓核细胞凋亡从而发挥上述作用,但其进一步的分子机制一直未被详细阐明.目的:观察骨形态发生蛋白7对无血清诱导下发生凋亡的人髓核细胞产生的作用及其对PI3K/Akt通路的影响,分析并探讨骨形态发生蛋白7抑制人髓核细胞凋亡的分子机制.方法:通过改良Pfirrmann分级及相关条件选取12例患者获取椎间盘组织,采用酶消化法获取人髓核细胞后分组实验,以含体积分数15％胎牛血清的培养基正常培养的髓核细胞设为空白组;使用无血清培养基培养48 h诱导凋亡作为阳性对照组;在无血清条件下,通过加入不同剂量的骨形态发生蛋白7以及同时添加PI3K/Akt通路拮抗剂LY294002形成处理组和拮抗组.使用流式细胞术检测各组细胞凋亡率;免疫荧光观察p-Akt表达;蛋白印迹法检测Akt,p-Akt,BAD和Caspase 9等通路蛋白的表达变化.结果与结论:无血清凋亡诱导下,流式细胞术结果显示,随着骨形态发生蛋白7处理浓度上升,髓核细胞凋亡率明显下降,加入LY294002共同作用后细胞凋亡率再次升高(P＜0.05).p-Akt免疫荧光和蛋白印迹法检测结果进一步表明,与凋亡阳性对照组相比,加入骨形态发生蛋白7的实验组中,p-Akt表达明显增加,其下游凋亡相关蛋白BAD、Caspase 9蛋白表达减少(P＜0.05),而在同时加入Akt通路拮抗剂LY294002后,p-Akt蛋白表达下降而凋亡相关蛋白的表达又恢复到相对较高的水平(P＜0.05).结果证明,骨形态发生蛋白7在无血清诱导的人类髓核细胞凋亡中通过激活PI3K/Akt通路,拮抗了BAD-Caspase 9相关的细胞凋亡过程,抑制了髓核细胞的退变.
揹景:骨形態髮生蛋白7可促進人髓覈細胞的細胞外基質閤成,減緩椎間盤退變.近年來,有學者提齣其可能通過對抗髓覈細胞凋亡從而髮揮上述作用,但其進一步的分子機製一直未被詳細闡明.目的:觀察骨形態髮生蛋白7對無血清誘導下髮生凋亡的人髓覈細胞產生的作用及其對PI3K/Akt通路的影響,分析併探討骨形態髮生蛋白7抑製人髓覈細胞凋亡的分子機製.方法:通過改良Pfirrmann分級及相關條件選取12例患者穫取椎間盤組織,採用酶消化法穫取人髓覈細胞後分組實驗,以含體積分數15％胎牛血清的培養基正常培養的髓覈細胞設為空白組;使用無血清培養基培養48 h誘導凋亡作為暘性對照組;在無血清條件下,通過加入不同劑量的骨形態髮生蛋白7以及同時添加PI3K/Akt通路拮抗劑LY294002形成處理組和拮抗組.使用流式細胞術檢測各組細胞凋亡率;免疫熒光觀察p-Akt錶達;蛋白印跡法檢測Akt,p-Akt,BAD和Caspase 9等通路蛋白的錶達變化.結果與結論:無血清凋亡誘導下,流式細胞術結果顯示,隨著骨形態髮生蛋白7處理濃度上升,髓覈細胞凋亡率明顯下降,加入LY294002共同作用後細胞凋亡率再次升高(P＜0.05).p-Akt免疫熒光和蛋白印跡法檢測結果進一步錶明,與凋亡暘性對照組相比,加入骨形態髮生蛋白7的實驗組中,p-Akt錶達明顯增加,其下遊凋亡相關蛋白BAD、Caspase 9蛋白錶達減少(P＜0.05),而在同時加入Akt通路拮抗劑LY294002後,p-Akt蛋白錶達下降而凋亡相關蛋白的錶達又恢複到相對較高的水平(P＜0.05).結果證明,骨形態髮生蛋白7在無血清誘導的人類髓覈細胞凋亡中通過激活PI3K/Akt通路,拮抗瞭BAD-Caspase 9相關的細胞凋亡過程,抑製瞭髓覈細胞的退變.
배경:골형태발생단백7가촉진인수핵세포적세포외기질합성,감완추간반퇴변.근년래,유학자제출기가능통과대항수핵세포조망종이발휘상술작용,단기진일보적분자궤제일직미피상세천명.목적:관찰골형태발생단백7대무혈청유도하발생조망적인수핵세포산생적작용급기대PI3K/Akt통로적영향,분석병탐토골형태발생단백7억제인수핵세포조망적분자궤제.방법:통과개량Pfirrmann분급급상관조건선취12례환자획취추간반조직,채용매소화법획취인수핵세포후분조실험,이함체적분수15％태우혈청적배양기정상배양적수핵세포설위공백조;사용무혈청배양기배양48 h유도조망작위양성대조조;재무혈청조건하,통과가입불동제량적골형태발생단백7이급동시첨가PI3K/Akt통로길항제LY294002형성처리조화길항조.사용류식세포술검측각조세포조망솔;면역형광관찰p-Akt표체;단백인적법검측Akt,p-Akt,BAD화Caspase 9등통로단백적표체변화.결과여결론:무혈청조망유도하,류식세포술결과현시,수착골형태발생단백7처리농도상승,수핵세포조망솔명현하강,가입LY294002공동작용후세포조망솔재차승고(P＜0.05).p-Akt면역형광화단백인적법검측결과진일보표명,여조망양성대조조상비,가입골형태발생단백7적실험조중,p-Akt표체명현증가,기하유조망상관단백BAD、Caspase 9단백표체감소(P＜0.05),이재동시가입Akt통로길항제LY294002후,p-Akt단백표체하강이조망상관단백적표체우회복도상대교고적수평(P＜0.05).결과증명,골형태발생단백7재무혈청유도적인류수핵세포조망중통과격활PI3K/Akt통로,길항료BAD-Caspase 9상관적세포조망과정,억제료수핵세포적퇴변.
