广东海洋大学学报
廣東海洋大學學報
엄동해양대학학보
JOURNAL OF GUANGDONG OCEAN UNIVERSITY
2014年
4期
50-55
,共6页
王海阳%黄郁葱%丁燏%朱帆%简纪常%吴灶和
王海暘%黃鬱蔥%丁燏%硃帆%簡紀常%吳竈和
왕해양%황욱총%정율%주범%간기상%오조화
哈维氏弧菌%谷胱甘肽硫转移酶%斜带石斑鱼%核酸疫苗
哈維氏弧菌%穀胱甘肽硫轉移酶%斜帶石斑魚%覈痠疫苗
합유씨호균%곡광감태류전이매%사대석반어%핵산역묘
Vibrio harveyi%Glutathione-S-transferase (GST)%Epinephelus coioides%DNA vaccine
通过同源引物从致病性哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)ZJ0603基因组中克隆GST的开放阅读框(ORF),构建真核表达质粒pcDNA-GST.大量抽提重组质粒后,于背鳍基部肌肉注射重组质粒免疫斜带石斑鱼(Epinephelus coioides),分析重组质粒的免疫效果.通过核酸水平检测重组质粒在鱼体肝、肌肉、头肾和脾脏组织的分布;用ELISA法检测鱼体血清的抗体水平,用Western-blot检测目的蛋白的表达情况.结果表明:该序列全长615 bp;免疫7d后,鱼体中均有质粒分布;斜带石斑鱼血清中产生抗GST的高效抗体(1:4096);相应的目的蛋白也在鱼体中成功表达.攻毒后,疫苗免疫保护率达80％,表明GST可作为防治哈维氏弧菌病有效候选抗原.
通過同源引物從緻病性哈維氏弧菌(Vibrio harveyi)ZJ0603基因組中剋隆GST的開放閱讀框(ORF),構建真覈錶達質粒pcDNA-GST.大量抽提重組質粒後,于揹鰭基部肌肉註射重組質粒免疫斜帶石斑魚(Epinephelus coioides),分析重組質粒的免疫效果.通過覈痠水平檢測重組質粒在魚體肝、肌肉、頭腎和脾髒組織的分佈;用ELISA法檢測魚體血清的抗體水平,用Western-blot檢測目的蛋白的錶達情況.結果錶明:該序列全長615 bp;免疫7d後,魚體中均有質粒分佈;斜帶石斑魚血清中產生抗GST的高效抗體(1:4096);相應的目的蛋白也在魚體中成功錶達.攻毒後,疫苗免疫保護率達80％,錶明GST可作為防治哈維氏弧菌病有效候選抗原.
통과동원인물종치병성합유씨호균(Vibrio harveyi)ZJ0603기인조중극륭GST적개방열독광(ORF),구건진핵표체질립pcDNA-GST.대량추제중조질립후,우배기기부기육주사중조질립면역사대석반어(Epinephelus coioides),분석중조질립적면역효과.통과핵산수평검측중조질립재어체간、기육、두신화비장조직적분포;용ELISA법검측어체혈청적항체수평,용Western-blot검측목적단백적표체정황.결과표명:해서렬전장615 bp;면역7d후,어체중균유질립분포;사대석반어혈청중산생항GST적고효항체(1:4096);상응적목적단백야재어체중성공표체.공독후,역묘면역보호솔체80％,표명GST가작위방치합유씨호균병유효후선항원.
