中国神经免疫学和神经病学杂志
中國神經免疫學和神經病學雜誌
중국신경면역학화신경병학잡지
CHINESE JOURNAL OF NEUROIMMUNOLOGY AND
2014年
5期
335-339
,共5页
巩固%袁利邦%殷亮%蔡琳%吴畏%胡玲
鞏固%袁利邦%慇亮%蔡琳%吳畏%鬍玲
공고%원리방%은량%채림%오외%호령
神经元细胞%脂多糖应答基因%1-磷脂酰肌醇3-激酶%活化蛋白激酶B%再灌注损伤
神經元細胞%脂多糖應答基因%1-燐脂酰肌醇3-激酶%活化蛋白激酶B%再灌註損傷
신경원세포%지다당응답기인%1-린지선기순3-격매%활화단백격매B%재관주손상
neuron%lipopolysaccharide respond gene%1-phosphatidylinostol 3-kinase%activated protein kinase%reperfusion injury
目的 研究神经元细胞中脂多糖应答基因(LRG)的表达对细胞类缺血再灌注损伤的影响.方法 将小鼠神经元细胞分为对照组和处理组,处理组给予体外类缺血再灌注处理,采用定量PCR(qPCR)和Western blot的方法检测细胞中LRG基因的表达.将原代培养的神经元细胞分为空白组、空载质粒组、过表达组、非特异小干扰RNA(siRNA)组、沉默组,过表达组/沉默组转染LRG基因过表达质粒或siRNA,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞经类缺血再灌注后的生长状况,同时利用Western blot分析细胞中活化蛋白激酶B(pAkt)的表达.将原代培养的神经元细胞再分为阴性对照组、过表达组和抑制剂组,抑制剂组利用20 μmol/L LY294002抑制细胞中磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)的正常功能,MTT法分析过表达LRG基因的细胞体外生长状况,同时利用Western blot方法分析细胞中活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)3的表达.结果 与对照组相比,类缺血再灌注处理显著降低细胞中LRG基因的表达(P＜0.05).过表达LRG基因可显著提高缺血再灌注损伤细胞在体外的存活(P＜0.05),而沉默LRG基因则降低细胞的存活(P＜0.05).同时,过表达LRG基因上调细胞中pAkt的表达而沉默LRG基因则下调pAkt的表达(P＜0.05).抑制神经元细胞中PI3K可降低缺血再灌注损伤后细胞的存活率(P＜0.05),并且提高细胞中活化caspase 3的表达(P＜0.05).结论 在神经元细胞中过表达LRG能通过激活PI3K/Akt信号途径降低细胞在类缺血再灌注中的损伤.
目的 研究神經元細胞中脂多糖應答基因(LRG)的錶達對細胞類缺血再灌註損傷的影響.方法 將小鼠神經元細胞分為對照組和處理組,處理組給予體外類缺血再灌註處理,採用定量PCR(qPCR)和Western blot的方法檢測細胞中LRG基因的錶達.將原代培養的神經元細胞分為空白組、空載質粒組、過錶達組、非特異小榦擾RNA(siRNA)組、沉默組,過錶達組/沉默組轉染LRG基因過錶達質粒或siRNA,採用噻唑藍(MTT)法檢測細胞經類缺血再灌註後的生長狀況,同時利用Western blot分析細胞中活化蛋白激酶B(pAkt)的錶達.將原代培養的神經元細胞再分為陰性對照組、過錶達組和抑製劑組,抑製劑組利用20 μmol/L LY294002抑製細胞中燐脂酰肌醇-3激酶(PI3K)的正常功能,MTT法分析過錶達LRG基因的細胞體外生長狀況,同時利用Western blot方法分析細胞中活化的半胱氨痠天鼕氨痠蛋白酶(caspase)3的錶達.結果 與對照組相比,類缺血再灌註處理顯著降低細胞中LRG基因的錶達(P＜0.05).過錶達LRG基因可顯著提高缺血再灌註損傷細胞在體外的存活(P＜0.05),而沉默LRG基因則降低細胞的存活(P＜0.05).同時,過錶達LRG基因上調細胞中pAkt的錶達而沉默LRG基因則下調pAkt的錶達(P＜0.05).抑製神經元細胞中PI3K可降低缺血再灌註損傷後細胞的存活率(P＜0.05),併且提高細胞中活化caspase 3的錶達(P＜0.05).結論 在神經元細胞中過錶達LRG能通過激活PI3K/Akt信號途徑降低細胞在類缺血再灌註中的損傷.
목적 연구신경원세포중지다당응답기인(LRG)적표체대세포류결혈재관주손상적영향.방법 장소서신경원세포분위대조조화처리조,처리조급여체외류결혈재관주처리,채용정량PCR(qPCR)화Western blot적방법검측세포중LRG기인적표체.장원대배양적신경원세포분위공백조、공재질립조、과표체조、비특이소간우RNA(siRNA)조、침묵조,과표체조/침묵조전염LRG기인과표체질립혹siRNA,채용새서람(MTT)법검측세포경류결혈재관주후적생장상황,동시이용Western blot분석세포중활화단백격매B(pAkt)적표체.장원대배양적신경원세포재분위음성대조조、과표체조화억제제조,억제제조이용20 μmol/L LY294002억제세포중린지선기순-3격매(PI3K)적정상공능,MTT법분석과표체LRG기인적세포체외생장상황,동시이용Western blot방법분석세포중활화적반광안산천동안산단백매(caspase)3적표체.결과 여대조조상비,류결혈재관주처리현저강저세포중LRG기인적표체(P＜0.05).과표체LRG기인가현저제고결혈재관주손상세포재체외적존활(P＜0.05),이침묵LRG기인칙강저세포적존활(P＜0.05).동시,과표체LRG기인상조세포중pAkt적표체이침묵LRG기인칙하조pAkt적표체(P＜0.05).억제신경원세포중PI3K가강저결혈재관주손상후세포적존활솔(P＜0.05),병차제고세포중활화caspase 3적표체(P＜0.05).결론 재신경원세포중과표체LRG능통과격활PI3K/Akt신호도경강저세포재류결혈재관주중적손상.
