CAJ | 학술논문

将逆转录环介导的等温扩增技术(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)引入到鱼类的传染性造血器官坏死病病毒(infectious haematopoietic necrosis virus,IHNV)检测中,建立了简单、快速、灵敏的IHNV检测方法.针对IHNV的聚合酶蛋白基因(polymerase protein,L)设计特异性引物,以IHNV基因组RNA为模板,在反转录酶和BstDNA聚合酶的作用下进行RT-LAMP,反应产物添加SYBR Green Ⅰ荧光染料后,肉眼观察阳性样本表现为荧光绿色,阴性样本表现为红棕色.2％琼脂糖凝胶电泳检测结果与可视化检测结果一致.该方法实现了检测结果的可视化.特异性分析显示该方法不与传染性胰脏坏死病毒(infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)及病毒性出血性败血症病毒(viral haemorrhagic septicaemia virus,VHSV)发生交叉反应,并且可检测不低于10 pfu的IHNV RNA.本研究所建立的IHNV RT-LAMP可视化检测方法具有灵敏度高、特异性好、成本低、不依赖任何专门的仪器设备的优点,其检测结果直观可视化,可实现现场高通量快速检测.
장역전록배개도적등온확증기술(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)인입도어류적전염성조혈기관배사병병독(infectious haematopoietic necrosis virus,IHNV)검측중,건립료간단、쾌속、령민적IHNV검측방법.침대IHNV적취합매단백기인(polymerase protein,L)설계특이성인물,이IHNV기인조RNA위모판,재반전록매화BstDNA취합매적작용하진행RT-LAMP,반응산물첨가SYBR Green Ⅰ형광염료후,육안관찰양성양본표현위형광록색,음성양본표현위홍종색.2％경지당응효전영검측결과여가시화검측결과일치.해방법실현료검측결과적가시화.특이성분석현시해방법불여전염성이장배사병독(infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)급병독성출혈성패혈증병독(viral haemorrhagic septicaemia virus,VHSV)발생교차반응,병차가검측불저우10 pfu적IHNV RNA.본연구소건립적IHNV RT-LAMP가시화검측방법구유령민도고、특이성호、성본저、불의뢰임하전문적의기설비적우점,기검측결과직관가시화,가실현현장고통량쾌속검측.