畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2014年
10期
1-5
,共5页
张娈娈%陈利苹%曹俊%崔保亮%李华芳%刘思国
張孌孌%陳利蘋%曹俊%崔保亮%李華芳%劉思國
장련련%진리평%조준%최보량%리화방%류사국
Rv3802e蛋白%pC3.1-3LHF-Red重组质粒%内部核糖体进入位点(IRES)%CHO细胞
Rv3802e蛋白%pC3.1-3LHF-Red重組質粒%內部覈糖體進入位點(IRES)%CHO細胞
Rv3802e단백%pC3.1-3LHF-Red중조질립%내부핵당체진입위점(IRES)%CHO세포
Rv3802c protein%pC3.1-3LHF-Red recombinant plasmid%internal ribosome entry site (IRES)%CHO cell
为了构建结核分枝杆菌rv3802c基因双顺反子真核表达质粒,本研究利用重叠延伸PCR技术扩增出rv3802c-HisFlag基因片段,将其克隆到真核表达载体pCDNA3.1(+)上,测序验证后,将基因合成的内部核糖体进入位点和增强型红色荧光蛋白基因片段(IRES-DsRed2)定向插入到这个重组质粒上,经酶切鉴定获得双顺反子表达质粒pC3.1-3LHF-Red.将质粒pC3.1-3LHF-Red转染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,通过荧光显微镜观察到增强型红色荧光蛋白成功表达;经Western blot分析表明Rv3802c-HisFlag融合蛋白在CHO细胞中获得了表达.结果表明,本研究成功构建了共表达增强型红色荧光蛋白和Rv3802c-HisFlag融合蛋白的双顺反子表达质粒pC3.1-3LHF-Red,为进一步研究结核分枝杆菌Rv3802c蛋白在分枝杆菌感染细胞过程中的作用奠定基础.
為瞭構建結覈分枝桿菌rv3802c基因雙順反子真覈錶達質粒,本研究利用重疊延伸PCR技術擴增齣rv3802c-HisFlag基因片段,將其剋隆到真覈錶達載體pCDNA3.1(+)上,測序驗證後,將基因閤成的內部覈糖體進入位點和增彊型紅色熒光蛋白基因片段(IRES-DsRed2)定嚮插入到這箇重組質粒上,經酶切鑒定穫得雙順反子錶達質粒pC3.1-3LHF-Red.將質粒pC3.1-3LHF-Red轉染中國倉鼠卵巢(CHO)細胞,通過熒光顯微鏡觀察到增彊型紅色熒光蛋白成功錶達;經Western blot分析錶明Rv3802c-HisFlag融閤蛋白在CHO細胞中穫得瞭錶達.結果錶明,本研究成功構建瞭共錶達增彊型紅色熒光蛋白和Rv3802c-HisFlag融閤蛋白的雙順反子錶達質粒pC3.1-3LHF-Red,為進一步研究結覈分枝桿菌Rv3802c蛋白在分枝桿菌感染細胞過程中的作用奠定基礎.
위료구건결핵분지간균rv3802c기인쌍순반자진핵표체질립,본연구이용중첩연신PCR기술확증출rv3802c-HisFlag기인편단,장기극륭도진핵표체재체pCDNA3.1(+)상,측서험증후,장기인합성적내부핵당체진입위점화증강형홍색형광단백기인편단(IRES-DsRed2)정향삽입도저개중조질립상,경매절감정획득쌍순반자표체질립pC3.1-3LHF-Red.장질립pC3.1-3LHF-Red전염중국창서란소(CHO)세포,통과형광현미경관찰도증강형홍색형광단백성공표체;경Western blot분석표명Rv3802c-HisFlag융합단백재CHO세포중획득료표체.결과표명,본연구성공구건료공표체증강형홍색형광단백화Rv3802c-HisFlag융합단백적쌍순반자표체질립pC3.1-3LHF-Red,위진일보연구결핵분지간균Rv3802c단백재분지간균감염세포과정중적작용전정기출.
