畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2014年
2期
5-9
,共5页
弓形虫%CDPK1-EF基因%克隆%表达
弓形蟲%CDPK1-EF基因%剋隆%錶達
궁형충%CDPK1-EF기인%극륭%표체
Toxoplasma gondii%CDPK1-EF gene%cloning%expression
CDPK是一类钙依赖蛋白激酶,其可参与调控寄生虫入侵,外出宿主细胞,配子的形成及在宿主体内移行等.采用RT-PCR技术,扩增弓形虫RH株目的基因钙依赖蛋白激酶EF模体(CDPK1-EF),然后将其克隆至表达载体pET-32a,以构建重组质粒ET-32a-CDPK1-EF,经IPTG诱导目的蛋白表达,并采用Ni-NTA亲和层析法纯化,最后经SDS-PAGE分析重组表达蛋白.结果,成功地克隆出弓形虫CDPK1-EF基因,序列比对表明,其与GenBank报道的相关序列同源性达100％.采用SDS-PAGE技术对诱导表达蛋白以及纯化产物检测发现37 ku目的蛋白出现,与预期结果相一致.本文在国内首次成功克隆和表达弓形虫RH株CDPK1-EF基因,这为研究该基因功能及分布特征等提供了基础.
CDPK是一類鈣依賴蛋白激酶,其可參與調控寄生蟲入侵,外齣宿主細胞,配子的形成及在宿主體內移行等.採用RT-PCR技術,擴增弓形蟲RH株目的基因鈣依賴蛋白激酶EF模體(CDPK1-EF),然後將其剋隆至錶達載體pET-32a,以構建重組質粒ET-32a-CDPK1-EF,經IPTG誘導目的蛋白錶達,併採用Ni-NTA親和層析法純化,最後經SDS-PAGE分析重組錶達蛋白.結果,成功地剋隆齣弓形蟲CDPK1-EF基因,序列比對錶明,其與GenBank報道的相關序列同源性達100％.採用SDS-PAGE技術對誘導錶達蛋白以及純化產物檢測髮現37 ku目的蛋白齣現,與預期結果相一緻.本文在國內首次成功剋隆和錶達弓形蟲RH株CDPK1-EF基因,這為研究該基因功能及分佈特徵等提供瞭基礎.
CDPK시일류개의뢰단백격매,기가삼여조공기생충입침,외출숙주세포,배자적형성급재숙주체내이행등.채용RT-PCR기술,확증궁형충RH주목적기인개의뢰단백격매EF모체(CDPK1-EF),연후장기극륭지표체재체pET-32a,이구건중조질립ET-32a-CDPK1-EF,경IPTG유도목적단백표체,병채용Ni-NTA친화층석법순화,최후경SDS-PAGE분석중조표체단백.결과,성공지극륭출궁형충CDPK1-EF기인,서렬비대표명,기여GenBank보도적상관서렬동원성체100％.채용SDS-PAGE기술대유도표체단백이급순화산물검측발현37 ku목적단백출현,여예기결과상일치.본문재국내수차성공극륭화표체궁형충RH주CDPK1-EF기인,저위연구해기인공능급분포특정등제공료기출.
