畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2014年
3期
87-90
,共4页
伪狂犬病病毒%gE基因%原核表达
偽狂犬病病毒%gE基因%原覈錶達
위광견병병독%gE기인%원핵표체
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根据GenBank中登录的猪伪狂犬病毒(PRV) gE基因序列,设计特异性表达引物,扩增gE富含B细胞表位的一段编码序列.扩增片段通过BamH Ⅰ和SalⅠ酶切位点插入表达载体pET-30a.序列测定表明,重组表达质粒所含的gE基因读码框正确.重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3) pLys,经IPTG诱导表达目的蛋白.表达产物经SDS-PAGE和Western blot检测表明,gE基因主要表位区成功地在大肠杆菌表达,表达产物约为28 ku的融合蛋白,能与PRV感染动物血清发生特异性反应,具有良好的反应原性.以纯化的gE蛋白为包被抗原,建立了ELISA检测方法.本试验为我国实施伪狂犬病的扑灭计划提供了必要的手段.
根據GenBank中登錄的豬偽狂犬病毒(PRV) gE基因序列,設計特異性錶達引物,擴增gE富含B細胞錶位的一段編碼序列.擴增片段通過BamH Ⅰ和SalⅠ酶切位點插入錶達載體pET-30a.序列測定錶明,重組錶達質粒所含的gE基因讀碼框正確.重組錶達質粒轉化大腸桿菌BL21(DE3) pLys,經IPTG誘導錶達目的蛋白.錶達產物經SDS-PAGE和Western blot檢測錶明,gE基因主要錶位區成功地在大腸桿菌錶達,錶達產物約為28 ku的融閤蛋白,能與PRV感染動物血清髮生特異性反應,具有良好的反應原性.以純化的gE蛋白為包被抗原,建立瞭ELISA檢測方法.本試驗為我國實施偽狂犬病的撲滅計劃提供瞭必要的手段.
근거GenBank중등록적저위광견병독(PRV) gE기인서렬,설계특이성표체인물,확증gE부함B세포표위적일단편마서렬.확증편단통과BamH Ⅰ화SalⅠ매절위점삽입표체재체pET-30a.서렬측정표명,중조표체질립소함적gE기인독마광정학.중조표체질립전화대장간균BL21(DE3) pLys,경IPTG유도표체목적단백.표체산물경SDS-PAGE화Western blot검측표명,gE기인주요표위구성공지재대장간균표체,표체산물약위28 ku적융합단백,능여PRV감염동물혈청발생특이성반응,구유량호적반응원성.이순화적gE단백위포피항원,건립료ELISA검측방법.본시험위아국실시위광견병적복멸계화제공료필요적수단.
