畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2014年
3期
76-79
,共4页
范锋%徐正中%倪谷音%毛爱民%杨卫冲%陈祥
範鋒%徐正中%倪穀音%毛愛民%楊衛遲%陳祥
범봉%서정중%예곡음%모애민%양위충%진상
奶牛%γ-干扰素%克隆%原核表达
奶牛%γ-榦擾素%剋隆%原覈錶達
내우%γ-간우소%극륭%원핵표체
@@
根据黑白花奶牛γ-干扰素(BovIFN-γ)基因的序列,通过RT-PCR扩增出BovIFN-γ cDNA,并将其定向插入原核表达质粒pET-30a(+)和pGEX-6P-1,经DNA测序后,分别转化大肠杆菌BL21 (DE3),经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,分别表达出大小在23和43 ku左右的融合蛋白.通过对诱导剂的浓度、诱导起始时间、诱导持续时间的筛选,对表达条件进行了优化,BL21 (DE3) /pET-30a(+)-BovIFN-γ与BI21/pGEX-6P-1-BovIFN-γ的融合蛋白的相对表达量最高时可分别达到菌体总蛋白的60％和45％左右.使用纯化的融合蛋白rHis-BovIFN-γ和rGST-BovIFN-γ进行细胞病变抑制试验,证实表达产物具有较高抗病毒感染活性,在牛肾细胞(MDBK)上抑制水疱性口炎病毒的活性分别为2.15×107和1.21×105 U· mg-1.
根據黑白花奶牛γ-榦擾素(BovIFN-γ)基因的序列,通過RT-PCR擴增齣BovIFN-γ cDNA,併將其定嚮插入原覈錶達質粒pET-30a(+)和pGEX-6P-1,經DNA測序後,分彆轉化大腸桿菌BL21 (DE3),經異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)誘導,分彆錶達齣大小在23和43 ku左右的融閤蛋白.通過對誘導劑的濃度、誘導起始時間、誘導持續時間的篩選,對錶達條件進行瞭優化,BL21 (DE3) /pET-30a(+)-BovIFN-γ與BI21/pGEX-6P-1-BovIFN-γ的融閤蛋白的相對錶達量最高時可分彆達到菌體總蛋白的60％和45％左右.使用純化的融閤蛋白rHis-BovIFN-γ和rGST-BovIFN-γ進行細胞病變抑製試驗,證實錶達產物具有較高抗病毒感染活性,在牛腎細胞(MDBK)上抑製水皰性口炎病毒的活性分彆為2.15×107和1.21×105 U· mg-1.
근거흑백화내우γ-간우소(BovIFN-γ)기인적서렬,통과RT-PCR확증출BovIFN-γ cDNA,병장기정향삽입원핵표체질립pET-30a(+)화pGEX-6P-1,경DNA측서후,분별전화대장간균BL21 (DE3),경이병기류대반유당감(IPTG)유도,분별표체출대소재23화43 ku좌우적융합단백.통과대유도제적농도、유도기시시간、유도지속시간적사선,대표체조건진행료우화,BL21 (DE3) /pET-30a(+)-BovIFN-γ여BI21/pGEX-6P-1-BovIFN-γ적융합단백적상대표체량최고시가분별체도균체총단백적60％화45％좌우.사용순화적융합단백rHis-BovIFN-γ화rGST-BovIFN-γ진행세포병변억제시험,증실표체산물구유교고항병독감염활성,재우신세포(MDBK)상억제수포성구염병독적활성분별위2.15×107화1.21×105 U· mg-1.
