畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2014年
3期
15-19
,共5页
查国飞%唐应华%陆吉虎%陈辉%刘振兴%田震%侯继波%李培英
查國飛%唐應華%陸吉虎%陳輝%劉振興%田震%侯繼波%李培英
사국비%당응화%륙길호%진휘%류진흥%전진%후계파%리배영
禽流感病毒%HA蛋白%杆状病毒%活性
禽流感病毒%HA蛋白%桿狀病毒%活性
금류감병독%HA단백%간상병독%활성
H5 subtype avian influenza virus%HA protein%baculovirus%activity
通过PCR方法从人工合成的质粒(232HAc-T)扩增获得全长的HA基因和缺失信号肽及跨膜区的HA基因.将此HA基因克隆至杆状病毒表达系统,构建重组穿梭载体rBac-232HAc和rBac-232HAδST,转染Sf9细胞后获得重组的杆状病毒rAc-232HAc和rAc-232HAδST.重组病毒在Sf9细胞中表达2种重组蛋白232HAc和232HAδST.2种蛋白在SDS-PAGE和Western blot检测中均获得预期目的条带,间接免疫荧光(IFA)检测呈阳性.血凝试验结果显示,232HAc蛋白能够使红细胞凝集,血凝(HA)效价为81og2;而232HAδST的HA效价低于21og2.血凝抑制试验结果表明,232HAc蛋白与H5阳性血清反应良好,效价类似于H5检测抗原对照,但不与其他病毒血清反应.结果提示:2种重组蛋白均能在Sf9细胞中表达,但重组232HAc蛋白能具有较好的血凝性,并能被H5阳性血清特异性抑制.本研究为研发H5亚型禽流感HA蛋白亚单位疫苗提供了生物材料.
通過PCR方法從人工閤成的質粒(232HAc-T)擴增穫得全長的HA基因和缺失信號肽及跨膜區的HA基因.將此HA基因剋隆至桿狀病毒錶達繫統,構建重組穿梭載體rBac-232HAc和rBac-232HAδST,轉染Sf9細胞後穫得重組的桿狀病毒rAc-232HAc和rAc-232HAδST.重組病毒在Sf9細胞中錶達2種重組蛋白232HAc和232HAδST.2種蛋白在SDS-PAGE和Western blot檢測中均穫得預期目的條帶,間接免疫熒光(IFA)檢測呈暘性.血凝試驗結果顯示,232HAc蛋白能夠使紅細胞凝集,血凝(HA)效價為81og2;而232HAδST的HA效價低于21og2.血凝抑製試驗結果錶明,232HAc蛋白與H5暘性血清反應良好,效價類似于H5檢測抗原對照,但不與其他病毒血清反應.結果提示:2種重組蛋白均能在Sf9細胞中錶達,但重組232HAc蛋白能具有較好的血凝性,併能被H5暘性血清特異性抑製.本研究為研髮H5亞型禽流感HA蛋白亞單位疫苗提供瞭生物材料.
통과PCR방법종인공합성적질립(232HAc-T)확증획득전장적HA기인화결실신호태급과막구적HA기인.장차HA기인극륭지간상병독표체계통,구건중조천사재체rBac-232HAc화rBac-232HAδST,전염Sf9세포후획득중조적간상병독rAc-232HAc화rAc-232HAδST.중조병독재Sf9세포중표체2충중조단백232HAc화232HAδST.2충단백재SDS-PAGE화Western blot검측중균획득예기목적조대,간접면역형광(IFA)검측정양성.혈응시험결과현시,232HAc단백능구사홍세포응집,혈응(HA)효개위81og2;이232HAδST적HA효개저우21og2.혈응억제시험결과표명,232HAc단백여H5양성혈청반응량호,효개유사우H5검측항원대조,단불여기타병독혈청반응.결과제시:2충중조단백균능재Sf9세포중표체,단중조232HAc단백능구유교호적혈응성,병능피H5양성혈청특이성억제.본연구위연발H5아형금류감HA단백아단위역묘제공료생물재료.
