畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2014年
5期
35-40
,共6页
郑芳园%陈攀%范宝超%李玉峰
鄭芳園%陳攀%範寶超%李玉峰
정방완%진반%범보초%리옥봉
猪流行性腹泻病毒%M蛋白%S蛋白%原核表达%多克隆抗体
豬流行性腹瀉病毒%M蛋白%S蛋白%原覈錶達%多剋隆抗體
저류행성복사병독%M단백%S단백%원핵표체%다극륭항체
porcine epidemic diarrhea virus (PEDV)%M protein%S protein%prokaryotic expression%polyclonal antibody
采用PCR方法对猪流行性腹泻病毒(PEDV)M蛋白和S蛋白基因的亲水区进行扩增,扩增片段(命名为Ma和Sa)分别克隆至原核表达载体pET-32a(+)和pGEX-6p-1中,获得的重组质粒pET-32a-Ma和pGEX-6p-1-Sa转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE及Westernblot鉴定.表达产物经SDS-PAGE后切胶免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,间接ELISA方法检测小鼠免疫后血清效价,Westemblot和间接免疫荧光方法检测抗体的特异性.结果表明目标蛋白获得了正确表达,且制备的多克隆抗体具有较高的敏感性和特异性.PEDV Ma和Sa蛋白的表达及多克隆抗体的制备将为进一步构建PEDV的病毒样颗粒(VLP)抗原和建立血清学检测方法奠定基础.
採用PCR方法對豬流行性腹瀉病毒(PEDV)M蛋白和S蛋白基因的親水區進行擴增,擴增片段(命名為Ma和Sa)分彆剋隆至原覈錶達載體pET-32a(+)和pGEX-6p-1中,穫得的重組質粒pET-32a-Ma和pGEX-6p-1-Sa轉化大腸桿菌BL21,經IPTG誘導錶達後進行SDS-PAGE及Westernblot鑒定.錶達產物經SDS-PAGE後切膠免疫BALB/c小鼠製備多剋隆抗體,間接ELISA方法檢測小鼠免疫後血清效價,Westemblot和間接免疫熒光方法檢測抗體的特異性.結果錶明目標蛋白穫得瞭正確錶達,且製備的多剋隆抗體具有較高的敏感性和特異性.PEDV Ma和Sa蛋白的錶達及多剋隆抗體的製備將為進一步構建PEDV的病毒樣顆粒(VLP)抗原和建立血清學檢測方法奠定基礎.
채용PCR방법대저류행성복사병독(PEDV)M단백화S단백기인적친수구진행확증,확증편단(명명위Ma화Sa)분별극륭지원핵표체재체pET-32a(+)화pGEX-6p-1중,획득적중조질립pET-32a-Ma화pGEX-6p-1-Sa전화대장간균BL21,경IPTG유도표체후진행SDS-PAGE급Westernblot감정.표체산물경SDS-PAGE후절효면역BALB/c소서제비다극륭항체,간접ELISA방법검측소서면역후혈청효개,Westemblot화간접면역형광방법검측항체적특이성.결과표명목표단백획득료정학표체,차제비적다극륭항체구유교고적민감성화특이성.PEDV Ma화Sa단백적표체급다극륭항체적제비장위진일보구건PEDV적병독양과립(VLP)항원화건립혈청학검측방법전정기출.
