畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2014年
5期
1-5
,共5页
时晓丽%谈晨%赵攀登%白娟%李玉峰%姜平
時曉麗%談晨%趙攀登%白娟%李玉峰%薑平
시효려%담신%조반등%백연%리옥봉%강평
猪流行性腹泻病毒%N蛋白%单克隆抗体
豬流行性腹瀉病毒%N蛋白%單剋隆抗體
저류행성복사병독%N단백%단극륭항체
porcine epidemic diarrhea virus (PEDV)%N protein%monoclonal antibodies
采用RT-PCR扩增猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白基因并克隆至原核表达载体pET-28a,转化到宿主表达菌BL21后经IPTG诱导表达和Ni柱纯化,SDS-PAGE和Western Blot鉴定重组N蛋白,其大小约为58 ku.将纯化重组N蛋白免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合,PEDV间接ELISA方法筛选,制备获得4株能稳定分泌PEDV抗体的杂交瘤细胞株1C9、4C8、4F8和6A11.Western blot和间接免疫荧光试验证明其与PEDV均有特异性反应,单抗亚类鉴定均属于IgG1,轻链为κ型.杂交瘤细胞培养上清ELISA抗体效价为1:1600～6400,腹水ELISA抗体效价达1:1.024x105以上;4株细胞连续培养20代,其ELISA抗体效价基本一致.本研究为PEDV感染的诊断和致病机制研究提供了有用工具.
採用RT-PCR擴增豬流行性腹瀉病毒(PEDV)N蛋白基因併剋隆至原覈錶達載體pET-28a,轉化到宿主錶達菌BL21後經IPTG誘導錶達和Ni柱純化,SDS-PAGE和Western Blot鑒定重組N蛋白,其大小約為58 ku.將純化重組N蛋白免疫BALB/c小鼠,通過雜交瘤細胞融閤,PEDV間接ELISA方法篩選,製備穫得4株能穩定分泌PEDV抗體的雜交瘤細胞株1C9、4C8、4F8和6A11.Western blot和間接免疫熒光試驗證明其與PEDV均有特異性反應,單抗亞類鑒定均屬于IgG1,輕鏈為κ型.雜交瘤細胞培養上清ELISA抗體效價為1:1600～6400,腹水ELISA抗體效價達1:1.024x105以上;4株細胞連續培養20代,其ELISA抗體效價基本一緻.本研究為PEDV感染的診斷和緻病機製研究提供瞭有用工具.
채용RT-PCR확증저류행성복사병독(PEDV)N단백기인병극륭지원핵표체재체pET-28a,전화도숙주표체균BL21후경IPTG유도표체화Ni주순화,SDS-PAGE화Western Blot감정중조N단백,기대소약위58 ku.장순화중조N단백면역BALB/c소서,통과잡교류세포융합,PEDV간접ELISA방법사선,제비획득4주능은정분비PEDV항체적잡교류세포주1C9、4C8、4F8화6A11.Western blot화간접면역형광시험증명기여PEDV균유특이성반응,단항아류감정균속우IgG1,경련위κ형.잡교류세포배양상청ELISA항체효개위1:1600～6400,복수ELISA항체효개체1:1.024x105이상;4주세포련속배양20대,기ELISA항체효개기본일치.본연구위PEDV감염적진단화치병궤제연구제공료유용공구.
