畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2014年
6期
20-22
,共3页
张杰%马会杰%崔军%孟范勇%侯加法
張傑%馬會傑%崔軍%孟範勇%侯加法
장걸%마회걸%최군%맹범용%후가법
成骨细胞%鸡%转染%RNA干扰%脂质体
成骨細胞%鷄%轉染%RNA榦擾%脂質體
성골세포%계%전염%RNA간우%지질체
osteoblast%chicken%transfection%RNAi%liposome
本试验的目的是优化转染条件,提高在阳离子脂质体LipofectamineTM 2000介导下鸡TRPV6基因RNA干扰(RNAi)质粒转染入成骨细胞的效率.将携带绿色荧光蛋白基因的真核表达载体pSIREN-retroQ-shTRPV6在LipofectamineTM 2000介导下转染至鸡成骨缅胞,对转染前缅胞融合度、质粒质量与脂质体体积比及转染时间进行优化,在荧光倒置显微镜下观察并计算转染效率,MTT法检测在不同质粒质量与脂质体体积比条件下成骨细胞的活性.结果表明,在转染前细胞融合达到90％以上,质粒DNA与脂质体比例为1:2.5时转染效率最高,并且在转染后48 h转染效果最好,对细胞的毒性作用较小.本试验优化了脂质体介导转染鸡成骨细胞的条件,提高了转染效率,为用RNA干扰技术研究鸡TRPV6基因功能奠定了基础.
本試驗的目的是優化轉染條件,提高在暘離子脂質體LipofectamineTM 2000介導下鷄TRPV6基因RNA榦擾(RNAi)質粒轉染入成骨細胞的效率.將攜帶綠色熒光蛋白基因的真覈錶達載體pSIREN-retroQ-shTRPV6在LipofectamineTM 2000介導下轉染至鷄成骨緬胞,對轉染前緬胞融閤度、質粒質量與脂質體體積比及轉染時間進行優化,在熒光倒置顯微鏡下觀察併計算轉染效率,MTT法檢測在不同質粒質量與脂質體體積比條件下成骨細胞的活性.結果錶明,在轉染前細胞融閤達到90％以上,質粒DNA與脂質體比例為1:2.5時轉染效率最高,併且在轉染後48 h轉染效果最好,對細胞的毒性作用較小.本試驗優化瞭脂質體介導轉染鷄成骨細胞的條件,提高瞭轉染效率,為用RNA榦擾技術研究鷄TRPV6基因功能奠定瞭基礎.
본시험적목적시우화전염조건,제고재양리자지질체LipofectamineTM 2000개도하계TRPV6기인RNA간우(RNAi)질립전염입성골세포적효솔.장휴대록색형광단백기인적진핵표체재체pSIREN-retroQ-shTRPV6재LipofectamineTM 2000개도하전염지계성골면포,대전염전면포융합도、질립질량여지질체체적비급전염시간진행우화,재형광도치현미경하관찰병계산전염효솔,MTT법검측재불동질립질량여지질체체적비조건하성골세포적활성.결과표명,재전염전세포융합체도90％이상,질립DNA여지질체비례위1:2.5시전염효솔최고,병차재전염후48 h전염효과최호,대세포적독성작용교소.본시험우화료지질체개도전염계성골세포적조건,제고료전염효솔,위용RNA간우기술연구계TRPV6기인공능전정료기출.
