畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2014年
6期
1-8
,共8页
张燕%王芳%胡波%宋艳华%范志宇%魏后军%姜平
張燕%王芳%鬍波%宋豔華%範誌宇%魏後軍%薑平
장연%왕방%호파%송염화%범지우%위후군%강평
兔出血症病毒%VP60%OVA%T细胞表位%病毒样颗粒
兔齣血癥病毒%VP60%OVA%T細胞錶位%病毒樣顆粒
토출혈증병독%VP60%OVA%T세포표위%병독양과립
RHDV%VP60%OVA%T-cell epitopes%VLPs
在兔出血症病毒(RHDV)主要结构蛋白VP60的N端插入双串联卵清蛋白(OVA) CD8+T细胞表位(OVA第257-264位氨基酸),研究外源片段对VP60蛋白表达及病毒样颗粒(VLPs)装配的影响,分析VP60作为载体的可行性和对外源基因长度的耐受性.通过分子生物学方法将双串联OVA CD8+T细胞表位(257-264aa)插入至RHDV衣壳蛋白VP60基因序列的N端,得到重组VP60基因.利用杆状病毒表达系统表达嵌合蛋白,并命名为DN.经RT-PCR、间接免疫荧光、SDS-PAGE、Western blot方法鉴定嵌合蛋白DN的表达,利用电镜观察嵌合蛋白病毒样颗粒的形成.结果表明嵌合VP60蛋白在杆状病毒表达系统中得到高效表达,且可形成与RHDV VLPs类似的病毒样颗粒.本研究为VP60作为载体系统,有效提呈外源片段的研究提供了重要依据,同时也为VLPs疫苗的研制奠定了基础.
在兔齣血癥病毒(RHDV)主要結構蛋白VP60的N耑插入雙串聯卵清蛋白(OVA) CD8+T細胞錶位(OVA第257-264位氨基痠),研究外源片段對VP60蛋白錶達及病毒樣顆粒(VLPs)裝配的影響,分析VP60作為載體的可行性和對外源基因長度的耐受性.通過分子生物學方法將雙串聯OVA CD8+T細胞錶位(257-264aa)插入至RHDV衣殼蛋白VP60基因序列的N耑,得到重組VP60基因.利用桿狀病毒錶達繫統錶達嵌閤蛋白,併命名為DN.經RT-PCR、間接免疫熒光、SDS-PAGE、Western blot方法鑒定嵌閤蛋白DN的錶達,利用電鏡觀察嵌閤蛋白病毒樣顆粒的形成.結果錶明嵌閤VP60蛋白在桿狀病毒錶達繫統中得到高效錶達,且可形成與RHDV VLPs類似的病毒樣顆粒.本研究為VP60作為載體繫統,有效提呈外源片段的研究提供瞭重要依據,同時也為VLPs疫苗的研製奠定瞭基礎.
재토출혈증병독(RHDV)주요결구단백VP60적N단삽입쌍천련란청단백(OVA) CD8+T세포표위(OVA제257-264위안기산),연구외원편단대VP60단백표체급병독양과립(VLPs)장배적영향,분석VP60작위재체적가행성화대외원기인장도적내수성.통과분자생물학방법장쌍천련OVA CD8+T세포표위(257-264aa)삽입지RHDV의각단백VP60기인서렬적N단,득도중조VP60기인.이용간상병독표체계통표체감합단백,병명명위DN.경RT-PCR、간접면역형광、SDS-PAGE、Western blot방법감정감합단백DN적표체,이용전경관찰감합단백병독양과립적형성.결과표명감합VP60단백재간상병독표체계통중득도고효표체,차가형성여RHDV VLPs유사적병독양과립.본연구위VP60작위재체계통,유효제정외원편단적연구제공료중요의거,동시야위VLPs역묘적연제전정료기출.
